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《壯骨顆粒對骨髓間充質干細胞分化影響的實驗研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、萬方數據·410·CJTCMOct．2010V01．22No．5壯骨顆粒對骨髓問充質干細胞分化影響的實驗研究木陳德喜郎繼孝邢志軍于沛林趙景明李巍山東省青島市海慈醫(yī)療集團骨傷科266033摘要目的：探索壯骨顆粒對骨髓間充質干細胞(MSCs)增殖和分化的影響。方法：通過全骨髓貼壁法分離3—4月齡的正常新西蘭大白兔的骨髓，利用差速貼壁原理純化MSCs并通過形態(tài)學(光鏡)、流式細胞儀對大白兔MSCs表面抗原測定對其進行鑒定，建立穩(wěn)定的MSCs培養(yǎng)體系，分別添加壯骨顆粒組和硫酸氨基葡萄糖組工作液，然后分別進行增殖活性以及分化活性的測定。結果：
2、壯骨顆粒組和硫酸氨基葡萄糖組軟骨細胞的增殖和分化活性均高于空白組(P<0．01)；壯骨顆粒組的增殖活性高于硫酸氨基葡萄糖組，2組軟骨細胞分化相差不大。結論：壯骨顆粒可以明顯促進MSCs增殖和分化。關鍵詞壯骨顆粒骨髓充質干細胞增殖分化骨髓中除了造血干細胞(hematopoieticstemeeUs，HSC)以外，還存在著另外一類干細胞，即間充質干細胞(mesenchymalstemcells，MSC)oMSC是骨髓造血微環(huán)境中的一種重要細胞成分，具有較強的自我增殖能力和多向分化潛能，因其在體外可被誘導分化為軟骨細胞、成骨細胞、脂肪細胞
3、、骨骼肌細胞、神經細胞、內皮細胞、上皮細胞、心肌細胞、肝細胞及胰島素分泌細胞等，而被譽為組織工程理想的“種子細胞”和體內外基因轉移的靶細胞。骨髓MSC適合自體移植且無免疫排斥反應，不存在倫理、道德和法律爭議，克服了胚胎干細胞的弊端，具有一獨特的優(yōu)勢，近年來成為除胚胎干細胞外的又一重要研究領域。老年性骨關節(jié)炎與骨髓MSCs關系是MSCs的數量不足和質量的下降。隨年齡的增長和機體的衰老，MSCs的數量以及與成骨有關的激素和生長因子如雌激素、胰島素樣生長因子、鈣調節(jié)激素和轉換生長因子、成纖維細胞生長因子等在骨組織中的含量均出現減少?，這些
4、改變是造成老年性骨關節(jié)形成功能減退退化的重要原因。本試驗通‘2007年山東省中醫(yī)藥發(fā)展計劃(編號：2007—182)過壯骨顆粒，采用體外培養(yǎng)MSCs技術，建立誘導MSCs軟骨向分化的細胞模型，從細胞形態(tài)學方面，觀察藥物對MSCs軟骨分化的作用。深入探討中藥防治骨性關節(jié)炎的作用機理。材料和方法通過全骨髓貼壁法分離3—4月齡的正常新西蘭大白兔的骨髓，利用差速貼壁原理純化MSCs并通過形態(tài)學(光鏡)、流式細胞儀對大白兔MSCs表面抗原測定對其進行鑒定，建立穩(wěn)定的MSCs培養(yǎng)體系。根據人兔模型系數，電子天平稱取壯骨顆粒(杜仲、牛膝、淫羊藿等
5、提取液)90mg和硫酸氨基葡萄糖30rag，加入少量的二甲基亞楓(DMSO)充分溶解后，分別用培養(yǎng)基配成濃度為l×103mg／L的工作溶液，0．221xm針孔濾器過濾除菌分裝，一20。C避光保存。l壯骨顆粒對MSCs增殖活性的測定取生長狀態(tài)良好的第三代MSCs，胰酶消化后，制成單細胞懸液，以1×104何IIll接種于96孔板，每孔中的體積分別為200斗1，24小時待所有細胞貼壁后，吸討論晚期癌癥患者多有明顯軀體不適合、情志異常。中醫(yī)認為情志異?？蓪е屡K腑．．精、氣、血、神等多方面的異常，《靈樞·本草》日：“怵惕思慮者則傷神，神傷則恐
6、懼流淫而不止，因悲哀動中者，竭絕而失生?！边@充分說明了心理護理與疾病康復的重要性。癌痛和其他軀體癥狀常嚴重影響患者生活質量口】。晚期癌癥患者的治療以對癥支持治療，減輕臨床癥狀，提高患者生活質量，延長生存期為預期目標。積極采取中醫(yī)護理措施，可以發(fā)揮操作簡便、療效穩(wěn)定、經濟實惠的優(yōu)勢。加強與患者交流，可以減輕患者心理負擔，提高接受治療的依從性，同時在實踐中發(fā)揮中醫(yī)護理技術的參與率，提高了護理人員的工作積極性。參考文獻1張惠蘭，陳榮秀．癌癥護理學．天津：天津科學技術出社。1999．392袁秋影．吳雪蘭．護理干預對乳腺癌患者心理健康的影響．
7、現代醫(yī)院，2006，6(11)：663鄭寧，初文霞．健康教育在臨床護理中的應用．職業(yè)與健康，2005。21(10)：1656收稿日期：2010—04—06責任編校：胡順金萬方數據出每孔培養(yǎng)液，添加壯骨顆粒和硫酸氨基葡萄糖溶液。另設空白對照組和調零組各5個復孔。培養(yǎng)8d后，M'I'T測定吸光值，測定時棄去培養(yǎng)液，PBS液沖洗3次。更換無血清的DMEM培養(yǎng)基90肛l，加入20fnlMlT(59n)，在37℃，5％CO：中孵育4小時后吸取培養(yǎng)液，加入DMS0150¨I／孔，微孔板振蕩器振蕩10分鐘，于酶標儀上測OD值，測量波長為570nm
8、，參比波長655nm，以未接種細胞的孔作為調零孔。了解不同濃度的蛇床子素對MSCs增殖的影響。2壯骨顆粒對MSCs軟骨向分化測定取生長狀態(tài)良好的第三代MSCs0．25％的胰蛋白酶消化后，制備成單細胞懸液，以2x104似IIll按種于2
