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《tpa和pai-1在牛卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體體外成熟進(jìn)程中的作用初探》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、分類號(hào)S828學(xué)校代碼10129UDC11.220學(xué)號(hào)2010201039tPA和PAI-1在牛卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體體外成熟進(jìn)程中的作用初探EffectsoftPAandPAI-1onBovineCumulusOocyteComplexesDuringinVitroMaturation申請(qǐng)人：張伶俐學(xué)科門類：農(nóng)學(xué)學(xué)科專業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)研究方向：動(dòng)物組織胚胎與發(fā)育生物學(xué)指導(dǎo)教師：徐曉靜副教授李海軍副教授論文提交日期：二〇一三年六月摘要為了解組織型纖溶酶原激活劑(tissueplasminogenactivator，tPA)和纖溶酶原激活劑抑制劑1(plasmin
2、ogenactivatorinhibitor，PAI-1)在牛卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體（COCs）體外成熟進(jìn)程中的可能作用；本研究首先運(yùn)用了實(shí)時(shí)定量RT-PCR和ELISA技術(shù)檢測(cè)了體外不同成熟時(shí)間（0h、8h、16h和24h）卵丘細(xì)胞中纖溶酶原（plasminogen）基因相對(duì)表達(dá)變化和tPA活性變化，然后通過(guò)添加不同濃度的tPA（0ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml）、PAI-1(0ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml)觀察透明質(zhì)酸合成酶2（Hyaluronansynthase2,HAS2）基因在體外成熟培養(yǎng)1
3、6h牛卵丘細(xì)胞中相對(duì)表達(dá)變化。最后以1ng/mltPA與10ng/mlPAI做添加組合，在體外成熟培養(yǎng)16h后，統(tǒng)計(jì)牛卵丘細(xì)胞中HAS2基因相對(duì)表達(dá)，牛卵母細(xì)胞中GDF-9、BMP-15基因相對(duì)表達(dá)，以及牛COCS的擴(kuò)散程度。結(jié)果如下，1.在COCs體外成熟過(guò)程中，牛卵丘細(xì)胞PlasminogenmRNA相對(duì)表達(dá)，在成熟8h和24h顯著高于0h和16h(P<0.05)；同時(shí)卵丘細(xì)胞中的tPA活性在成熟培養(yǎng)8h和24h均高于16h且差異顯著(P<0.05)。2.分別添加不同濃度tPA、PAI-1(0ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml)
4、體外成熟16h后，HAS2基因在各tPA添加組卵丘細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)水平低于對(duì)照組，其中1ng/ml添加組最低，與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)；添加不同濃度PAI-1處理后，在1ng/ml和10ng/ml添加組卵丘細(xì)胞中的HAS2mRNA相對(duì)表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，其中10ng/ml添加組最高3.以1ng/mltPA和10ng/mlPAI-1做添加組合，在體外成熟16h后發(fā)現(xiàn)，在PAI-1添加組中，卵丘細(xì)胞的HAS2mRNA相對(duì)表達(dá)水平顯著高于其他各處理組(P<0.05)；卵丘層的擴(kuò)散程度顯著高于對(duì)照組和tPA添加組(P<0.05)。同時(shí)卵母細(xì)胞中BM
5、P-15和GDF-9的mRNA相對(duì)表達(dá)水平在tPA添加組最高，PAI-1添加組最低，倆者差異顯著(P<0.05)。綜上，tPA在體外成熟早期（8h前后）可能有重要作用。在體外成熟16h，PAI-1在促進(jìn)牛卵丘細(xì)胞表達(dá)HAS2基因和擴(kuò)散發(fā)生的同時(shí)又下調(diào)了卵母細(xì)胞中BMP-15和GDF-9基因的表達(dá)水平；而tPA的作用與之相反。故此推測(cè)，PAI-1應(yīng)該是卵丘細(xì)胞分泌的并促進(jìn)其在成熟過(guò)程中擴(kuò)散發(fā)生的重要調(diào)節(jié)因子。關(guān)鍵詞：tPA；PAI；牛；卵丘細(xì)胞；擴(kuò)散EffectsoftPAandPAI-1onbovinecumulusoocytecomplexesdurin
6、ginvitromaturationAbstractInordertounderstandtheeffectsoftissuePlasminogenactivatorandPlasminogenactivatorinbovinecumulusoocytecomplexes(COCs)maturationinvitro,real-timeRT-PCRandELISAtechniqueswereusedtodetecttherelativeexpressionofPlasminogengeneandtPAactivitychangesinbovineCOCsc
7、ulturedwith0h,8h,16hand24hinvitro,theexpressionofHyaluronansynthase2(HAS2)mRNAincumuluscellfreedfromCOCstreatedwithdifferentconcentrationoftPAandPAI-1inmaturationmediumandcultured16hinvitro,andHAS2geneexpressionofcumuluscellfromCOCs,therelativegeneexpressionchangesofGDF-9andBMP-15
8、incorrespondingoocytesofCOCstreat
