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1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。研究生虢陳釀導(dǎo)師獺芳主茹級(jí)學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)蓋章：屺糾。、＼川弓年；月硼研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除
2、了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：陳筏良目錄0IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIlY2337167中文摘要??????????????????????????1英文摘要??????????????????????????4英文縮寫??????????????????????????8研究論文siRNA抑制ZNFl39前后人胃癌原位移植裸鼠血清差異蛋白質(zhì)的篩選與鑒定前言???
3、???????????????????????9刖吾??????????????????????????材料與方法????????????????????．??1O結(jié)果???????????????????????．20多日木???????????????????????．附圖?????????????????????????．23附表?????????????????????????．32討論?????????????????????????．35結(jié)論???????????????????????
4、??．40參考文獻(xiàn)???????????????????????．40綜述差異蛋白組學(xué)在胃癌研究中的應(yīng)用????????????44致謝???????????????????????????．55個(gè)人簡(jiǎn)歷?????????????????????????．56中文摘要siRNA抑制ZNFl39前后人胃癌原位移植裸鼠血清差異蛋白質(zhì)的篩選與鑒定摘要目的：以胃癌SGC7901細(xì)胞原位移植裸鼠模型為對(duì)象，通過熒光雙向差異凝膠電泳(2D．DIGE)結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用(LC．MS)鑒定技術(shù)等蛋白質(zhì)組學(xué)方法研究抑制ZN
5、Fl39后對(duì)胃癌原位移植裸鼠血清的影響，為ZNF139參與胃癌進(jìn)展并發(fā)現(xiàn)新的腫瘤標(biāo)志物提供依據(jù)。方法：1培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞株SGC7901，針對(duì)ZNFl39基因設(shè)計(jì)siRNA，構(gòu)建siRNA．ZNFl39表達(dá)質(zhì)粒。通過X．tremeGENEHP轉(zhuǎn)染試劑介導(dǎo)轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞株SGC7901，并通過qRT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中ZNFl39mRNA的相對(duì)表達(dá)量，計(jì)算其抑制效率。2以siRNA．ZNFl39質(zhì)粒和陰性對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞SGC7901，G418篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞和普通的SGC7901細(xì)胞分別注入裸鼠皮下
6、。每4天測(cè)量皮下瘤長(zhǎng)短徑，待皮下瘤直徑約1．0cm左右時(shí)取出，剪成大小約lmm3瘤塊進(jìn)行鼠間傳代，將第六代皮下瘤應(yīng)用OB生物膠粘貼法進(jìn)行原位移植。3用血清白蛋白／免疫球蛋白清除試劑盒去除胃癌原位移植裸鼠血清中高豐度蛋白，利用SDS．PAGE檢測(cè)去除高豐度蛋白前后蛋白的完整性及血清蛋白的變化。4采用2D．DIGE技術(shù)分離siRNA．ZNF139干擾前后胃癌原位移植裸鼠血清蛋白。應(yīng)用DeCyderDifferentialAnalysisSoftware選取差異明顯的蛋白點(diǎn)并利用Ettanspotpick
7、er挖取膠中的差異蛋白點(diǎn)，膠內(nèi)酶解后利用LC．MS進(jìn)行分析。再應(yīng)用BioWorks軟件中的SEQUEST運(yùn)算方法進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)檢索。5將已鑒定的部分差異蛋白通過蛋白質(zhì)印記(Westernblot)從蛋白質(zhì)水平進(jìn)行驗(yàn)證，檢測(cè)是否與蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果一致。結(jié)果：1不同濃度siRNA．ZNFl39質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌SGC7901細(xì)胞后ZNFl39中文摘要mRNA表達(dá)的變化qRT-PCR檢測(cè)顯示在099／ml、0．41．tg／ml、0．699／ml、O．899／ml、1．099／ml重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的胃癌SGC7901細(xì)胞中
8、ZNFl39mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1．0034-0．0970，0．7517+0．0436，0．36114-0．0445，0．1622+0．0181，0．5531士0．0377，統(tǒng)計(jì)分析顯示與O嶺／ml組相比各組有顯著差異釁0．05)，其中以0．899／ml組抑制效率最高，為83．83％。2siRNA抑制ZNFl39對(duì)裸鼠皮下瘤生長(zhǎng)的影響接種胃癌細(xì)胞SGC7901六天后空白組和陰性組裸鼠均長(zhǎng)出皮下瘤，十天后實(shí)驗(yàn)組裸鼠可見皮下瘤，之后瘤體不斷增大。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明空白組皮
