資源描述：
《sirna抑制znf139對(duì)人胃癌裸鼠原位移植瘤及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、；可北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。研究生簽名：糨導(dǎo)師簽章孑易卅二級(jí)學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)蓋章：占／乞年鄉(xiāng)月傭河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文
2、中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：、’7律己導(dǎo)師簽章：知≥年弓月訂日目錄lllllIIIlLllllllllllULIIILIILILILIIlllY2337145中文摘要???????????????????????????·1英文摘要???????????????????????????·5研究論文siENA抑制ZNFl39對(duì)人胃癌裸鼠原位移植瘤及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究前言???·???????????????????????··lO日U吾???”“””””“???
3、”??????””???????””lU材料與方法????????????????????????n結(jié)果???·???????????????????????··21附圖???·······?····?···?··??????···??·?·????”·23附表?????????·?????????????????··37討{念?”·?····?????·????????··?·······?··???”4l結(jié)論???·?···?·??···????????··??·??·??·?··44參考文獻(xiàn)?????????????????????·00O
4、OOl45綜述RNA干擾技術(shù)在胃癌中的應(yīng)用??????????????”48致謝????·?···．．“····-·??????··???··-··?········?········?61個(gè)人簡歷???????????????????????????62中文摘要siRNA抑制ZNFl39對(duì)人胃癌裸鼠原位移植瘤及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究摘要目的：胃癌是世界最常見的惡性腫瘤之一，死亡率高，居消化系統(tǒng)惡性腫瘤首位。本實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn)ZNFl39的異常表達(dá)與胃癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移、增殖凋亡等密切相關(guān)，本實(shí)驗(yàn)以胃癌SGC7901細(xì)胞原位移裸鼠模型為對(duì)象
5、，通過熒光雙向差異凝膠電泳(2D．DIGE)結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用(LC．MS)等蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究抑制ZNFl39對(duì)胃癌的原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶的影響，為ZNFl39參與胃癌轉(zhuǎn)移調(diào)控機(jī)制提供依據(jù)。方法：l合成針對(duì)ZNFl39的小干擾RNA(s齜-ZNFl39)，以siRNA—ZNFl39質(zhì)粒對(duì)胃癌細(xì)胞系SG-C7901(中分化腺癌)進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染完成后甩(3418篩選?！w外培養(yǎng)對(duì)數(shù)生長期SGC7901細(xì)胞，以siRNA-ZNFl39質(zhì)粒對(duì)其進(jìn)行干擾，qRT-PCR檢測不同濃度siRNA．ZNFl39干擾質(zhì)粒抑制率，使用G418對(duì)干擾后細(xì)胞株進(jìn)行篩選，得到最適濃
6、度干擾細(xì)胞系。2建立人胃癌原位移植裸鼠模型體外收集經(jīng)G418篩選siRNA-ZNFl39質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞、陰性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞及普通SGC．7901細(xì)胞，接種至裸鼠皮下，皮下瘤鼠間傳代5次。將第六代皮下瘤剪成約lmm3大小瘤塊，用OB生物膠粘貼法進(jìn)行裸鼠原位移植。成瘤后每4天測量原位瘤長短徑，待直徑約1．0cm左右時(shí)，脫頸處死裸鼠，取出原位移植瘤、腹腔腫大淋巴結(jié)。每個(gè)標(biāo)本一分為三，兩份迅速置液氮灌中保存，一份用福爾馬林固定送病理檢查。3應(yīng)用熒光雙向差異凝膠電泳(2D-DIGE)技術(shù)分別分離siRNA-ZNFl39干擾前后胃原位移植瘤及腹腔轉(zhuǎn)移淋巴
7、結(jié)蛋白質(zhì)，選定差異點(diǎn)后，用Ettanspotpicker挖取，并行膠內(nèi)酶解，應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用(LC．MS)質(zhì)譜鑒定技術(shù)對(duì)挖取的蛋白質(zhì)點(diǎn)鑒定，并對(duì)鑒定出的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析。4應(yīng)用Westernblot方法驗(yàn)證裸鼠原位移植瘤組織及腹腔轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中差異蛋白質(zhì)的表達(dá)，檢測是否與蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果一致。中文摘要結(jié)果：1siRNA-ZNFl39質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌SGC7901細(xì)胞后ZNFl39mRNA表達(dá)的變化qRT-PCR檢測顯示在o,g／m、0．4}tg／p．1、0．6心山、o．8rted山、1．01ag／Ⅲ重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的SGC7901細(xì)胞中ZNFl39mRNA相對(duì)表
8、達(dá)量分別為1．0020a：0．0765，0．6788士0．1032，0．3691士0．0242，0．17114-0．0133，0．288
