資源描述：
《sirna抑制znf139對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響及機(jī)制研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、目錄中文摘要???????????????????????????1英文摘要???????????????????????????5英文縮寫(xiě)???????????????????????????9研究論文siRNA抑制ZNFl39對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響及機(jī)制研究前言??????????????????????????????????100月【f舌??????????????????????????????????材料與方法??????????????????????一11結(jié)果??????????????????
2、????????????????18附圖?????????????????????????··21附表??????????????????????????????????26討論??????????????????????????????????29結(jié)j滄??????????????????????????????????36參考文獻(xiàn)????????????????????????36綜述RNAi在消化系統(tǒng)腫瘤研究中的應(yīng)用與進(jìn)展????????41致謝?????????????????????????????53個(gè)
3、人簡(jiǎn)歷?????????????????????????”54中文摘要siRNA抑制ZNFl39對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響及機(jī)制研究摘要目的：胃癌是我國(guó)最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，目前對(duì)胃癌的治療措施是以手術(shù)為主導(dǎo)的綜合治療。但由于胃癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖及抗凋亡能力且進(jìn)展迅速，故目前對(duì)胃癌的治療結(jié)果還遠(yuǎn)不能令人滿意。因此，尋找影響胃癌細(xì)胞增殖、凋亡的新基因有重要意義。鋅指蛋白(zincfingerproteins，ZNFs)家族成員作為轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，可直接調(diào)節(jié)多種基因的表達(dá)，很多成員與惡性腫瘤的增殖、凋亡有關(guān)。鋅指蛋白
4、139(zincfingerprotein139，ZNFl39)是本研究所前期發(fā)現(xiàn)與胃癌關(guān)系密切的因子，但其是否能調(diào)節(jié)胃癌增殖凋亡未見(jiàn)報(bào)道。RNA干擾(RNAinterference，RNAi)技術(shù)是通過(guò)抑制顯性突變致癌基因的表達(dá)、擴(kuò)增、易位而成為從反面研究目的基因功能的一種有效方法。本實(shí)驗(yàn)以人工合成質(zhì)粒ZNFl39一siRNA轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞株SGC7901，采用四氮唑藍(lán)(MTT)比色法測(cè)定各處理組胃癌細(xì)胞活力，繪制轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞的時(shí)間．劑量曲線；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)的方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期變化；逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈
5、反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)ZNFl39、CyclinD1、PCNA、Caspase一3、Bcl．2在各處理組中的表達(dá)情況，從而探討其在胃癌增殖、凋亡調(diào)控中發(fā)揮的作用及機(jī)制。方法：以人胃癌細(xì)胞株SGC7901為研究對(duì)象，人工合成質(zhì)粒介導(dǎo)的ZNFl39．siRNA及非特異性siRNA載體。實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組(SGC7901)、實(shí)驗(yàn)組(轉(zhuǎn)染ZNFl39一siRNA-Psl的SGC7901)、陰性對(duì)照組(轉(zhuǎn)染ZNFl39一siRNA．PC的SGC7901)。首先以不同劑量的siRNA轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞SGC7901，MTT法測(cè)
6、定不同劑量siRNA轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞活力，繪制胃癌細(xì)胞的時(shí)間．劑量曲線，以得到siRNA干擾的最適時(shí)間和劑量。用此條件轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞后得到SGC7901／ZNFl39．siRNA細(xì)胞后，流式細(xì)胞術(shù)分別測(cè)定3組細(xì)胞不同時(shí)間的凋亡率及細(xì)胞周期變化。最后分別提取各組細(xì)胞總mRNA，RT-PCR法檢測(cè)3組細(xì)胞內(nèi)ZNFl39、CyclinD1、PCNA、Caspase．3、Bcl一2mRNA表達(dá)情況，最后應(yīng)用SPSSl3．0統(tǒng)計(jì)軟件單因素方差分析、Spearman相關(guān)等分析其表達(dá)。結(jié)果：中文摘要1三組凋亡率及細(xì)胞周期變化1．1各組
7、凋亡情況比較流式細(xì)胞術(shù)顯示實(shí)驗(yàn)組在ZNFl39．siRNA．Psl質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞SGC790124h、48h、72h后，均出現(xiàn)明顯的凋亡峰，凋亡率分別為(4．823+0．685％，16．8274-3．507％，20．107+3．305％)，空白對(duì)照組與陰性對(duì)照組未見(jiàn)凋亡峰出現(xiàn)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)組3個(gè)不同處理時(shí)間凋亡率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=-O．001)，空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組凋亡率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=-o．202，P=0．904)。實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組不同處理時(shí)間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(24h：t----8．826P=0．0
8、12，48h：盧．7．505P=0．016，72h：產(chǎn)．9．425P=0．008)。1．2各組細(xì)胞的細(xì)胞周期分布比較在處理24小時(shí)，三組細(xì)胞的細(xì)胞周期變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(廬O．388，P=-0．867)。處理48小時(shí)三組細(xì)胞的周期發(fā)生改變F=3．519，P=0．052，實(shí)驗(yàn)組G0／G1期細(xì)胞數(shù)增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0．010)，其細(xì)胞比例(62．100-J：1
