順鉑對 siRNA 抑制 ERCC1基因表達的A549細胞增殖、凋亡影響.pdf

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1、山東醫(yī)藥2014年第54卷第19期順鉑對siRNA抑制ERCC1基因表達的A549細胞增殖、凋亡影響宋瑩。仇秦威，賀智敏，谷依學(廣州醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所，廣州510095)摘要：目的觀察順鉑(eDDP)對小分子干擾RNA(siRNA)抑制切除修復(fù)交叉互補基因1(ERCC1)基因表達的A549細胞增殖、凋亡影響，并探討cDDP對siRNA抑制ERCC1基因表達的A549細胞化療敏感性。方法根據(jù)ER—CC1基因序列，設(shè)計合成3對特異性的siRNA(分別命名為s1、s2、s3)，同時合成陰

2、性對照siRNA(命名NC)。取對數(shù)生長期的A549細胞，采用Lip0fectarnine脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法進行s1、s2、s3、s1+s2+s3及Nc轉(zhuǎn)染，rea1．timeRT．PCR和Westernblotting技術(shù)檢測ERCC1mRNA和蛋白表達。結(jié)果與NC相比，s1、s2、s3及s1+s2+s3均能下調(diào)ERCC1表達，但s1+s2+s3下降最顯著。用NC及S1+s2+s3轉(zhuǎn)染A549細胞，24h后加入0,0．5?124、8g／mL的cDDP，采用MTS法計算細胞生存率及cDDP對細胞的半數(shù)

3、抑制濃度(IC。)。A549細胞轉(zhuǎn)染后48h加4S／mL的eDDP，流式細胞儀檢測細胞凋亡率。結(jié)果加入0、0．5?124、8Ixg／mL的cDDP，NC轉(zhuǎn)染的A549細胞存活率分別為100．00％±3．21％、94．86％士7．14％、89．79％4-3．29％、66．67％4-5．40％、33．31％±1．79％、19．12％±0．41％，S1+s2+s3轉(zhuǎn)染的A549細胞存活率分別為100．00％±6．53％、71．63％±8．23％、59．33％±0．94％、37．42％±1．57％、19

4、．41％±1．41％、12．75％±0．27％，相同eDDP濃度下A549細胞存活率比較，P均<0．05；S1+s2+s3、NC轉(zhuǎn)染細胞的Ic50分別為(1．25±0．11)、(3．09±0．36)g／mL，二者比較，P<0．01。未加cDDP時，NC與s1+s2+s3轉(zhuǎn)染A549細胞凋亡率分別為8．06％-4-1．79％、14．96％+-0．47％，加入eDDP后，細胞凋亡率分別為24．61％-4-1．98％、43．90％±3．01％，二者比較，P均<0．05。結(jié)論cDDP能降低siRNA抑制

5、ERCC1基因表達的A549細胞增殖能力，并誘導細胞凋亡；eDDP對siRNA抑制ERCC1基因表達的A549細胞化療敏感性升高。關(guān)鍵詞：切除修復(fù)交叉互補基因1；RNA干擾；順鉑；肺腫瘤；肺癌doi：10．3969／j。issn．1002-266X．2014．19．002中圖分類號：R734．2文獻標志碼：A文章編號：1002-266X(2014)19-0004-04EfectsofsiRNAsilencingERCC1geneexpressionandcisplatinonproliferat

6、ionandapoptosisofIungcancerA549cellssoNGYg。QIUQin—wei，HEzhi—min，GUYi—x,ll,e(CancerResearchCenter，AffiliatedCancerHospitalofGuangzhouMedwalUniversity，Guangzhou5l0095，China)Abstract：0bjectiveToinvestigatetheeffectsofsmallinterferingRNA(siRNA)down-regul

7、atingtheexcisionre—pairCROSSeomplementationgroup1(ERCC1)expressionandeisplatin(cDDP)ontheproliferationandapoptosisoflungcancerA549cellline．Furthermore，tostudythechemotherapysensitivityofA549cellswithdown-regulationofERCC1toeisplatin．MethodsThenegativ

8、econtrolsiRNA(NC)togetherwiththreepairsofsiRNAs(S1，s2ands3)targetingERCC1geneweredesignedandsynthesized．ThesiRNAs(S1，S2，S3，S1+s2+S3andNC)weretransfeetedintoA549ceilswithlipofectamine2000，respectively．ThemRNAandproteinexpressionlevelsofERCC1wereevalua