sirna介導(dǎo)bmpr-ⅱ基因沉默對人肝癌hepg2細胞增殖和侵襲的影響

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1、學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知,除了文中特別加以標注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得直昌太堂或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名(手寫):荏弄簽字日期:口2。f多年<月L日,爿\I學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱。本

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3、4llllll2lllllY2427142背景與目的:原發(fā)性肝細胞癌是我國常見的惡性腫瘤之一,近期研究發(fā)現(xiàn)骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bonemorphogeneticproteins,BMPs)信號通路在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本研究采用RNA干擾技術(shù)(RNAinterference,RNAi)抑制骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體II(bonemorphogeneticproteinreceptor,BMPR-II)表達,觀察抑制效果及抑制BMPR.II表達后對人肝癌HepG2細胞增殖和侵襲的影響。方法:設(shè)計并化學(xué)合成針對BMPR-Ⅱ的3對小干擾RNA(smalli

4、nterferingRNA,siRNA),陽離子脂質(zhì)體法瞬間轉(zhuǎn)染HepG2細胞。采用離體培養(yǎng)肝癌HepG2細胞,并設(shè)正常對照組、空白對照組、陰性siRNA組及siRNA.BMPR-II.a(chǎn)、siRNA.BMPR.II.b、siRNA.BMPR.II.C轉(zhuǎn)染組。各組培養(yǎng)48h后,運用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和Westernblot法檢測HepG2細胞中BMPR-II在mRNA和蛋白水平表達的變化,MTT比色法及Transwell侵襲實驗檢測轉(zhuǎn)染后細胞增殖及侵襲能力的變化。結(jié)果:RT-PCR、Westernblot顯示3對特異性siRN

5、A.BMPR.II轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染48h后,其BMPR-II的mRNA和蛋白表達與另三組比較受到明顯抑制,以siRNA.BMPR.II.a(chǎn)抑制效果最明顯(0.70士0.06、0.45士0.10,P<0.05)。MTT比色法及Transwell侵襲實驗顯示,轉(zhuǎn)染48h后,siRNA.BMPR.II.a(chǎn)轉(zhuǎn)染組HepG2細胞的生長及穿膜數(shù)(48.27%-40.76%、25.20士1.60,<0.05)明顯低于正常對照組(82.64%-40.67%、60.40士1.39)及陰性對照組(81.21%-40.80%、59.50士1.85)。結(jié)論:siRNA干擾介導(dǎo)B

6、MPR-II基因沉默可抑制人肝癌HepG2細胞的增殖和侵襲能力,BMPR.II可作為肝癌抗腫瘤治療的新靶點。關(guān)鍵詞:肝癌;RNA干擾;骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體II;增殖;侵襲。AbstractBackgroundandpurpose:ABSTRACTPrimaryhepatocellularcarcinomaisoneofthemostcommonmalignanttumorsinourcountry.Recentstudiesshowedthatbonemorphogeneticproteins(BMPs)signalingpathwaysplayak

7、eyroleinthedevelopmentoftumors.ThisstudyaimedtoinvestigatetheeffectofsmallinterferingRNA(siRNA)ontheinhibitingofbonemorphogeneticproteinreceptor(BMPR—II),andtoobserveitseffectontheproliferationandinvasionofhumanhepatomaHepG2cellsafterBMPR.IIsilencing.Methods:Threepairsofspecif

8、icsiRNAtargetingBMPR-11weredesignedandsynthesized,andthentran

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