中國鹵蟲caveolin-1基因克隆及功能初步的研究

中國鹵蟲caveolin-1基因克隆及功能初步的研究

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1、,f'j’,≯一學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人承諾:所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所取得的研究成果。論文中除特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,不包含他人和其他機(jī)構(gòu)已經(jīng)撰寫或發(fā)表過的研究成果,其他同志的研究成果對(duì)本人的啟示和所提供的幫助,均已在論文中做了明確的聲明并表示謝意。學(xué)位墓文作者簽名:i叁麴學(xué)位論文版權(quán)的使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解遼寧師范大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,及學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交復(fù)印件或磁盤,允許論文被查閱和借閱。本文授權(quán)遼寧師范大學(xué),可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫并進(jìn)行檢索,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存

2、、匯編學(xué)位論文,并且本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。保密的學(xué)位論文在解密后使用本授權(quán)書。學(xué)位論文作者簽名:指導(dǎo)教師簽名:簽名El期:砂,1年衫月穢-日1\j、·?0遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要窖蛋白是細(xì)胞膜上特殊內(nèi)陷結(jié)構(gòu)胞膜窖的標(biāo)志性蛋白,其主要功能是調(diào)節(jié)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。窖蛋白.1(Caveolin.1)是構(gòu)成胞膜窖的主要組成成分。其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的腳手架區(qū)的氨基酸序列高度保守,可以募集內(nèi)皮細(xì)胞生長因子,內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶,G.蛋白,活化的Src家族蛋白激酶和蛋白激酶C等信號(hào)分子,并導(dǎo)致下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)被抑制或者激活。鹵蟲(Artemia)隸屬于節(jié)肢動(dòng)物門

3、,甲殼綱,鰓足亞綱,無甲目,鹵蟲屬,是一種生活在高鹽海水或內(nèi)陸鹽湖,適應(yīng)性極強(qiáng)的小型甲殼動(dòng)物。鹵蟲以卵胎生的生殖方式繁殖,但在環(huán)境脅迫的極端環(huán)境下也通過卵生的方式產(chǎn)生休眠卵或稱滯育卵。也正因?yàn)槿绱?,休眠胚胎滯育的打破和胚胎發(fā)育的過程已成為發(fā)育生物的研究熱點(diǎn)。本文采用RACE技術(shù)擴(kuò)增了中國鹵蟲(Artemiasinica)caveolin.J基因的全長序列,并對(duì)得到的序列進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。用Real.time實(shí)時(shí)定量PCR定量分析各發(fā)育時(shí)期和不同環(huán)境壓力條件下caveolin—J表達(dá)量的變化,進(jìn)而分析鹵蟲caveolin.J基因的功能。結(jié)果如下:(1)通過實(shí)驗(yàn)

4、,我們得到長974bp的鹵蟲caveolin.J基因的全長序列,完整開放閱讀框大小為672bp。(2)經(jīng)生物信息學(xué)分析,ORF區(qū)編碼了一個(gè)含224個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì),預(yù)測分子量為25.4KDa,理論等電點(diǎn)為5.48。(3)鹵蟲胚胎發(fā)育不同時(shí)期,不同鹽度和菌刺激對(duì)鹵蟲的脅迫實(shí)驗(yàn)顯示,在0小時(shí),caveolin—J呈高表達(dá);高鹽濃度和菌刺激的條件下基因有上調(diào)趨勢。(4)推測鹵蟲caveolin.J可能具有參與先天性免疫并參與胚胎發(fā)育和調(diào)控細(xì)胞周期的功能。關(guān)鍵詞:中國鹵蟲;caveolin.J『基因克隆;胚胎發(fā)育;先天性免疫?!簦瘛瘛?●J~f0中國鹵蟲cav

5、eolin.J『基因的克隆及功能的初步研究Cloningand。?!畇tudyonfunctionofcaveolin一1Gene。Artem"lonmganpreliminarystudy0ntunctmnOtcaveolineneinArtemta—sinicaAbstractCaveolinsarethesignatureproteinsofspecializedinvaginationsoftheplasmamembranenamedeaveolae,whichfunctiontoregulatesignaltransductionwithinthece

6、ll.Caveolin-1isaprincipalstructuralcomponentofcaveolae.TheaminoacidsequenceofCaveolin-1scaffoldingdomainallowsthisproteintointeractandinhibitoractivate晰tllsignallingmoleculessuchasepidermalgrowthfactorreceptor,endothelialnitric-oxidesynthase,G-proteins,e-Sre—likekinases,proteinkinase

7、C.ArtemiasinicabelongstoPhylumArthropoda,ClassCmstacea,SubclassBranchiopoda,OrderAnostaca,FamilyArtemiidaeandGenusArtemiartemia.Itiswidelydistributinginsalternsandsaltlakesandpowerfuladaptationtoextremeenvironments.Artemiacangivingbirthtonaupliibytheovoviviparouspathway,butreleasesen

8、cystedembryo

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