東亞飛蝗Sex-lethal基因的克隆、表達及功能初步研究

東亞飛蝗Sex-lethal基因的克隆、表達及功能初步研究

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1、碩士學(xué)位論文東亞飛蝗Sex-lethal基因的克隆、表達及功能初步研究王鵬指導(dǎo)教師:何正波教授陳斌教授學(xué)科專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向:昆蟲分子生物學(xué)重慶師范大學(xué)生命科學(xué)院2014年4月萬方數(shù)據(jù)重慶師范大學(xué)碩士學(xué)位論文東亞飛蝗Sex-lethal基因的克隆、表達及功能初步研究碩士研究生:王鵬指導(dǎo)教師:何正波教授陳斌教授學(xué)科專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)所在學(xué)院:生命科學(xué)學(xué)院重慶師范大學(xué)2014年4月萬方數(shù)據(jù)DissertationforMaster’sDegreeofChongqingNormalUniversityCloni

2、ng,expressionandpreliminaryfunctionalanalysisofSex-lethalgenesfromorientalmigratorylocust,Locustamigratoriamanilensis(Meyen)Candidate:PengWangSupervisor:ZhengboHe(Professor)BinChen(Professor)Major:BiochemistryandMolecularBiologyCollegeCollegeofLifeSciencesChongqingNo

3、rmalUniversityApril,2014萬方數(shù)據(jù)重慶師范大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要東亞飛蝗Sex-lethal基因的克隆、表達及功能初步研究摘要東亞飛蝗Locustamigratoriamanilensis(Meyen)屬于直翅目,是一種漸變態(tài)昆蟲,具有發(fā)達的翅和較強的飛翔能力,能夠群集而遠距離遷飛,是其具有較大危害性、造成重大經(jīng)濟損失的主要原因。性別決定與分化是影響東亞飛蝗生殖、發(fā)育和種群結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵因素,但迄今為止東亞飛蝗性別決定的分子機制還沒有人研究。Sex-lethal(sxl)基因是黑腹果蠅(Drosophilam

4、elanogaster)性別決定通路上的關(guān)鍵基因,在黑腹果蠅性別決定中的作用已有深入的研究。除此之外,家蠶(Bombyxmori)、豌豆長管蚜(Acyrthosiphonpisum)、埃及伊蚊(Aedesaegypti)、岡比亞按蚊(Anophelesgambiae)、意蜂(Apismellifera)、橄欖果實蠅(Bactroceraoleae)、地中海果實蠅(Ceratitiscapitata)和紅顏金蠅(Chrysomyarufifacies)等昆蟲的Sxl基因也有報道。東亞飛蝗的Sxl尚無研究報道。本研究以東亞飛蝗為實驗

5、材料,克隆了Sxl基因的全長cDNA序列;采用定量PCR方法研究Sxl基因在東亞飛蝗不同組織和不同發(fā)育時期的表達情況,并采用RNAi技術(shù)初步研究了Sxl基因在東亞飛蝗體細胞性別決定中的作用。研究結(jié)果如下:①東亞飛蝗Sxl基因的克隆和分析采用生物信息學(xué)的方法從東亞飛蝗轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中克隆了Sxl基因的片段,采用RACE技術(shù)克隆到全長cDNA序列,長1039bp,開放閱讀框747bp,編碼248個氨基酸,推測蛋白質(zhì)分子量為28.1kDa,等電點為9.11。與豌豆長管蚜(Acyrthosiphonpisum)的相似性最高,保守結(jié)構(gòu)域分析

6、發(fā)現(xiàn)Sxl基因含有兩個RNA識別基序(RNArecognitionmotif,RRM)。②東亞飛蝗Sxl基因在不同不同發(fā)育時期和組織的表達情況東亞飛蝗Sxl基因在胚胎發(fā)育時期表達水平較低,隨著胚后發(fā)育表達水平逐漸增強,成蟲的表達水平最高,但在雌雄成蟲之間差異不明顯;在研究的組織中,Sxl基因在雌雄組織之間差異表達,雌蟲明顯高于雄蟲,尤其是在雌蟲的頭部、脂肪體、體壁、精巢和卵巢中表達水平較高。③東亞飛蝗Sxl基因功能的的初步研究采用RNAi技術(shù)抑制Sxl基因在胚胎發(fā)育過程中的表達。半定量PCR檢測注射dsRNA后Sxl基因的表達情

7、況,結(jié)果表明注射dsRNA24小時后,Sxl基因的表達水平I萬方數(shù)據(jù)重慶師范大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要已顯著下降。統(tǒng)計孵化后的雌雄比例,發(fā)現(xiàn)Sxl基因RNAi與對照的雌性比例無差異,說明東亞飛蝗Sxl基因有可能與性別決定無關(guān)。關(guān)鍵詞:東亞飛蝗,性別決定,Sxl,基因克隆,RNA干擾II萬方數(shù)據(jù)重慶師范大學(xué)碩士學(xué)位論文英文摘要Cloning,expressionandpreliminaryfunctionalanalysisofSex-lethalgenesfromorientalmigratorylocust,Locustamig

8、ratoriamanilensis(Meyen)ABSTRACTOrientalMigratoryLocust[Locustamigratoriamanilensis(Mayen)],whichbelongstoOrthoptera,isakindofinsec

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