資源描述：
《基于柯薩奇b3反向遺傳系統(tǒng)的病毒示蹤及cxcl10重組疫苗的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、博士學(xué)位論文基于柯薩奇B3反向遺傳系統(tǒng)的病毒示蹤及CXCL10重題目組疫苗的研究StudyofCXCL10RecombinantVaccineandViralTracking英文題目BasedonCoxsackievirusB3ReverseGeneticsSystem姓名曾俊學(xué)號21020011李康生教授所在學(xué)院醫(yī)學(xué)院導(dǎo)師姓名王革非副教授專業(yè)免疫學(xué)入學(xué)日期2010年9月答辯日期2013年6月學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的工作研究及取得的研究成果。論文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人或其它機構(gòu)已經(jīng)發(fā)表
2、或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻的個人和集體，均已在論文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。作者簽名：日期：年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人授權(quán)汕頭大學(xué)保存本學(xué)位論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱；學(xué)?？蓪⒈緦W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存和匯編論文；學(xué)校可以向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文并授權(quán)其保存、借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。對于保密的論文，按照保密的有關(guān)規(guī)定和程序處理。本論文屬于：保密（），在年解密后適用本授權(quán)聲明。不保密（）。
3、（請在以上括號內(nèi)打“√”）作者簽名：導(dǎo)師簽名：日期：年月日日期：年月日汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文基于柯薩奇B3反向遺傳系統(tǒng)的病毒示蹤及CXCL10重組疫苗的研究姓名：曾俊導(dǎo)師：李康生教授王革非副教授專業(yè)：免疫學(xué)研究方向：抗感染免疫培養(yǎng)單位：汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院入學(xué)時間：2010年9月答辯時間：2013年6月2013年4月汕頭StudyofCXCL10RecombinantVaccineandViralTrackingBasedonCoxsackievirusB3ReverseGeneticsSystemBy?Jun?Zeng?Directe
4、d?by??Prof.?Kang?sheng?Li??Associate?Prof.?Ge?fei?Wang?THESIS?SUBMITTED?IN?PARTIAL?SATISFACTION?OF?THE?REQUIREMENTS?FOR?THE?DEGREE?OF?DOCTOR?OF?PHILOSOPHY?IN?IMMUNOLOGY?(MEDICAL)?ShantouUniversityMedicalCollegeShantou,Guangdong,P.R.ChinaApril2013汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文中文摘要柯薩奇B3(C
5、oxsackievirusB3,CVB3)屬于小核糖核酸病毒科(Picornavirus)，腸道病毒屬(Enterovirus)B型，為無包膜的單股正鏈小RNA病毒。CVB3主要通過糞-口途徑傳播，是引起病毒性心肌炎最常見的致病原，也可引起手足口病。2008年我國部分地區(qū)暴發(fā)了以腸道病毒71型(Enterovirus71,EV71)為主要致病原的手足口病流行，但最近幾年CVA16，CVB3感染呈上升趨勢。盡管目前在CVB3的分子結(jié)構(gòu)，病理及診斷方面取得了很大的進展，但臨床上仍沒有針對CVB3感染的特效藥物和疫苗。本研究建立了CVB3反
6、向遺傳系統(tǒng)。在此基礎(chǔ)上，構(gòu)建了表達(dá)CXCL10的減毒疫苗，用于預(yù)防CVB3感染及感染后引起的病毒性心肌炎。本課題主要從事了以下三個方面的研究，研究內(nèi)容及結(jié)果如下：1.建立重組CVB3反向遺傳系統(tǒng)。本研究利用反向遺傳學(xué)技術(shù)克隆了CVB3全基因組，并構(gòu)建了重組CVB3感染性克隆質(zhì)粒。將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后COS-7細(xì)胞后，通過病毒引起細(xì)胞病變效應(yīng)、空斑實驗、細(xì)胞免疫熒光實驗以及westernblotting，證實我們成功獲得重組CVB3(rCV)；rCV可以在Vero細(xì)胞上穩(wěn)定傳代；rCV形成的病毒空斑小于CVB3野生型(CVB3-WT)。我們通過
7、測序分析，序列比對明確了CVB3的遺傳學(xué)背景以及rCV與CVB3-WT的基因組差異：共有20處堿基差異其中3個位于5’-NTR區(qū)，11個位于P1區(qū)，5個位于P2區(qū)以及1個3’-NTR區(qū)。這些堿基的差異導(dǎo)致11處氨基酸改變，其中P1區(qū)有8個氨基酸差異，這可能會引起病毒殼蛋白的構(gòu)象改變，導(dǎo)致病毒與細(xì)胞表面受體結(jié)合能力相比CVB3-WT下降，因而形成的蝕斑較小。2.構(gòu)建重組CVB3表達(dá)載體(rCV-CS)和GFP標(biāo)記的重組CVB3(rCV-GFP)。為了構(gòu)建重組CVB3表達(dá)載體用于疫苗研究，本研究在重組CVB3感染性克隆基礎(chǔ)上，進行了改造：
8、我們將CVB3病毒2A蛋白酶識別序列和多克隆位點插入rCV的P1區(qū)和P2區(qū)之間構(gòu)建了rCV-CS。為明確rCV-CS能否用于表達(dá)外源蛋白，同時也為了建立可示蹤CVB3，本研究將綠色熒光蛋白(GFP)基因插入rCV-CS的
