資源描述：
《hsp65-muc1腫瘤疫苗、hiv+dna疫苗和hiv重組痘病毒疫苗的臨床前毒理學(xué)研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文HSP65-MUC1腫瘤疫苗、HIVDNA疫苗和HIV重組痘病毒疫苗的臨床前毒理學(xué)研究姓名：霍艷申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：王軍志20070501獨(dú)創(chuàng)性聲明秉承學(xué)校嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶W(xué)風(fēng)與優(yōu)良的科學(xué)道德，本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，不包含本人或他人已申請學(xué)位或其他用途使用過的成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在
2、論文中作了明確的說明并表示了致謝。申請學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名：日期：保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)聲明本人完全了解第四軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬第四軍醫(yī)大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位仍然為第四軍醫(yī)大學(xué)。學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容（含電子版，保密內(nèi)容除外），可以采用影印，縮印或其他復(fù)制手段保存論文。學(xué)校有權(quán)允許論文被查閱和借閱，并在校園網(wǎng)上提供論文內(nèi)容的瀏覽和下載服務(wù)。論文作者簽名：導(dǎo)
3、師簽名：日期：第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文HSP65-MUC1腫瘤疫苗、HIVDNA疫苗和HIV重組痘病毒疫苗的臨床前毒理學(xué)研究博士研究生：霍艷導(dǎo)師：王軍志研究員中國藥品生物制品檢定所國家藥物安全評價(jià)監(jiān)測中心，北京100176中文摘要疫苗是使用最廣泛的藥物之一，不僅使天花、瘧疾等某些烈性傳染病得到有效的控制或消滅，而且還被應(yīng)用于腫瘤、自身免疫病、免疫缺陷、超敏反應(yīng)等疾病的預(yù)防和治療。新型疫苗是采用基因工程技術(shù)和生物化學(xué)合成技術(shù)生產(chǎn)的，包括裸DNA疫苗、重組蛋白類疫苗、合成肽疫苗、重組病毒和細(xì)菌疫苗等。
4、我國一直未要求對疫苗類藥物進(jìn)行全面的臨床前毒理學(xué)研究，國際上對于疫苗的臨床前安全性研究也處于探索階段。采用何種方法研究疫苗的毒性，特別是免疫毒性一直是困擾人們的課題。為解決我國不斷研制的新型疫苗在進(jìn)入臨床和市場前的安全性研究問題，本文選擇了我國獨(dú)立研發(fā)的具有自主知識產(chǎn)權(quán)的三種新型疫苗—熱休克蛋白－多肽復(fù)合物腫瘤疫苗（重組熱休克蛋白65－MUC1融合蛋白腫瘤疫苗，HSP65-MUC1）、HIVDNA疫苗（DNA疫苗）和HIV重組痘病毒載體疫苗（痘苗）作為研究對象（其中，包括以DNA疫苗和重組痘病毒載
5、體HIV疫苗組成的復(fù)合疫苗），對其進(jìn)行了免疫毒性、一般毒性以及DNA疫苗和病毒載體疫苗的生物分布研究，目的是為找出不同疫苗毒理學(xué)研究中的共性問題及特性問題，建立相應(yīng)的研究方法和研究體系。在本研究采用的免疫毒性檢測的方法包括：（1）免疫相關(guān)組織器官的宏觀和微觀病理學(xué)檢查；（2）非放射性CFSE染色法檢測淋巴細(xì)胞功能（3），巨2第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文噬細(xì)胞功能檢查（4）流式細(xì)胞法對不同亞型淋巴細(xì)胞數(shù)量的測定（5）ELISA檢測體液免疫；（6）ELISA法、細(xì)胞內(nèi)染色法、ELISPOT法檢測T細(xì)胞免疫
6、（細(xì)胞因子的產(chǎn)生）。本研究對DNA疫苗和病毒載體疫苗建立了實(shí)時(shí)定量PCR法檢測其DNA生物分布。一般毒性研究檢測疫苗對機(jī)體本身的宏觀毒性反應(yīng)，方法包括：血液學(xué)和血清生化學(xué)檢查、大體和組織病理學(xué)檢查、體重、攝食量、臨床癥狀的觀察等。HSP65-MUC1毒性的研究包括：C57BL/6小鼠單次給藥毒性研究、C57BL/6小鼠反復(fù)給藥毒性研究、恒河猴反復(fù)給藥毒性研究。以臨床研究擬用給藥次數(shù)為“n”，小鼠試驗(yàn)采用“n＋1”次給藥，恒河猴采用“n＋4”次給藥。研究內(nèi)容包括免疫毒性和一般毒性。DNA疫苗的研究包
7、含在復(fù)合疫苗的毒性研究中，采用BALB/c小鼠反復(fù)給藥研究，完全模擬臨床“3針DNA疫苗prime－1針病毒載體疫苗boost”的給藥方案。研究內(nèi)容包括免疫毒性、一般毒性和生物分布研究。痘苗毒性研究采用BALB/c小鼠，采用“n”次給藥和“n＋1”次給藥2種組合，研究內(nèi)容包括免疫毒性、一般毒性和生物分布研究。本研究中3種疫苗主要的毒性研究結(jié)果為：（1）在小鼠和恒河猴未見與HSP65-MUC1有關(guān)的全身毒性反應(yīng)和免疫毒性反應(yīng)；HSP65-MUC1可以誘導(dǎo)較強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)。（2）DNA疫苗
8、和痘苗的毒性反應(yīng)包括主要由痘苗引起的注射部位可逆性的局部刺激反應(yīng)、以及部分血液學(xué)指標(biāo)可逆性的變化；復(fù)合疫苗與兩種組分分別單獨(dú)使用相比，可以誘導(dǎo)較強(qiáng)的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。（3）組織分布研究發(fā)現(xiàn)DNA疫苗和痘苗在體內(nèi)不會廣泛分布、也不會長期殘留。本研究初步建立了關(guān)于疫苗毒理學(xué)研究的主要方法和研究體系，包括（1）建立了疫苗免疫毒性檢測的方法和體系：免疫相關(guān)組織器官的宏觀和微觀病3第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文理學(xué)檢查；建立了非放射性CFSE染色法檢測淋巴細(xì)胞功能的方法，采用亞型測定檢測淋巴細(xì)胞
