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《中藥對mcao大鼠腦巢蛋白表達的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、http://www.paper.edu.cn1中藥對MCAO大鼠腦巢蛋白表達的影響122周永紅，王新陸，胡懷強1青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院中醫(yī)教研室（266021）2山東中醫(yī)藥大學(xué)（250014）摘要：目的：研究中藥復(fù)方對大腦中動脈閉塞（MCAO）模型大鼠腦內(nèi)巢蛋白的影響，探討其促進神經(jīng)發(fā)生的作用。方法：30只大鼠隨機分為藥物組、病理模型組、正常對照組3組。用Tamura法造成MCAO大鼠模型，于造模成功后6天藥物組灌胃給予中藥復(fù)方復(fù)健片10g/kg，余二組分別灌胃給予同等量生理鹽水，日1次，共2周。用免疫組化法觀察MCAO大鼠腦內(nèi)巢蛋白的表達。結(jié)果：藥物組大鼠腦內(nèi)巢蛋白表達明顯增強。結(jié)論：中藥復(fù)
2、方復(fù)健片可顯著增強MCAO大鼠腦內(nèi)巢蛋白的表達，從而促進缺血性卒中神經(jīng)發(fā)生。關(guān)鍵詞：中藥；缺血性卒中；巢蛋白復(fù)健片是我們臨床治療缺血性卒中的經(jīng)驗方，具有滋補肝腎作用，是純中藥制劑。臨床研究表明，復(fù)健片可有效治療缺血性卒中，改善患者的神經(jīng)功能缺損評分、日常生活活動能力、智能狀況和胰島素抵抗狀態(tài)，還可增加梗死周圍組織及對側(cè)的局部腦血流[1]。為探討其作用機制是否與神經(jīng)發(fā)生有關(guān)，我們進行了深入的實驗研究。1實驗材料1.1實驗動物：普通級健康Wistar大鼠30只，12周齡，體重300±20g，雌雄不限（山東省實驗動物中心提供）。單籠飼養(yǎng)一周，自由飲水和攝食。飼養(yǎng)室溫度24-25℃，相對溫度7%
3、左右，光照明暗比為13：11。1.2實驗儀器：顯微手術(shù)鉆，XSZ-2型，上海光電公司；雙極電凝器，SJ-2型，上海光電公司；WT11001R型電子天平，江蘇省常州市萬得天平儀器廠；電熱恒溫水槽，DK-600型，上海精宏實驗設(shè)備有限公司；手術(shù)顯微鏡，光學(xué)顯微鏡均為上海醫(yī)用光學(xué)儀器廠產(chǎn)品；大鼠固定器。1.3實驗藥品及試劑：巢蛋白（nestin）免疫組化試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司；戊巴比妥鈉購自上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站分裝廠；注射用青霉素鈉購自山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司；氯代三苯基四氮唑（紅四氮唑，TTC）購自上海試劑三廠。2實驗方法2.1動物分組：實驗動物隨機分為藥物組、病理模型組、正
4、常對照組3組，每組10只。模型組和藥物組按下述方法制作大腦中動脈閉塞（middlecerebralarteryocclusion，1基金項目：國家自然科學(xué)基金（No.30171165）1http://www.paper.edu.cnMCAO）模型，假手術(shù)組大鼠行同樣開顱術(shù)，但不凝閉大腦中動脈，其余操作同模型組。[2]2.2大鼠MCAO模型的制備：按Tamura的方法稍加改進行右側(cè)近端大腦中動脈電凝術(shù)。麻醉醒后24h內(nèi)出現(xiàn)（1）左側(cè)肢體痛刺激收縮現(xiàn)象消失；（2）向左側(cè)傾倒或轉(zhuǎn)圈；（2）提尾時左上肢不能向前伸直。具備以上3項為MCAO模型復(fù)制成功，納入試驗，進行分組，余者棄之。2.3給藥方法
5、：藥物組灌胃給予復(fù)健片（由山東魯信藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，主要藥物為何首烏、草決明、桑寄生、海馬、淫羊藿等）水溶液10g/kg，余二組分別灌胃給予同等量生理鹽水，日1次，共2周。于造模成功后6d給藥，固體飼料和水自由攝取。2.4切片制作：實驗動物結(jié)束喂藥、末次觀察神經(jīng)系統(tǒng)癥狀后，迅速開胸暴露心臟，經(jīng)升主動脈插管后，先用100ml生理鹽水快速沖洗，隨后用4%多聚甲醛磷酸緩沖劑心臟灌注約30min，灌畢立即取腦浸入上述固定液1d，常規(guī)脫水、浸蠟、包埋。予正中隆起水平在切片機上行4μm連續(xù)冠狀切片備用。2.5巢蛋白表達：采用免疫組織化學(xué)法（ABC法）進行觀察。（1）免疫組織化學(xué)染色：石蠟切片常規(guī)脫蠟
6、復(fù)水；30%H2O21份+蒸餾水10份混合，室溫5～10分鐘以滅活內(nèi)源性酶，蒸餾水洗10min×3次；滴加復(fù)合消化液10min，蒸餾水洗3次；滴加正常山羊血清封閉液20min，不洗，甩去多余液體；滴加兔抗鼠Nestin一抗（l:2000，Sigma），室溫下（25℃）孵育2小時，再4℃過夜，PBS洗2min×3次；滴加生物素化山羊抗兔IgG，室溫下20min，PBS洗2min×3次；滴加試劑SABC復(fù)合物，室溫20min，PBS洗5min×4次；DAB顯色：使用DAB顯色試劑盒。取1ml蒸餾水，加試劑盒中A、B、C試劑各1滴，混勻后加至切片。室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時間，一般10分鐘左右。
7、蒸餾水多次洗滌；蘇木素輕度復(fù)染。脫水，透明，中性樹膠封片。顯微鏡觀察。（2）免疫組織化學(xué)染色對照：用正常山羊血清和PBS代替Nestin一抗作孵育，其余步驟同上，用以檢查Nestin免疫反應(yīng)的特異性。2.6圖像分析方法全部測量均在相同光學(xué)條件下完成。采用LeicaQwinV3圖像分析系統(tǒng)對免疫組化切片進行圖像分析，測定染色平均灰度。2.7統(tǒng)計學(xué)方法將所有數(shù)據(jù)輸入IBMPC機，應(yīng)用SPSS10.0軟件包進行統(tǒng)計分析。組間計量資料比較采
