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《雷帕霉素對膠質(zhì)瘤細(xì)胞糖代謝的影響及其抗腫瘤機(jī)制研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、中圖分類號R魚51UDC610博士學(xué)位論文學(xué)校代碼!Q53三密級公玨雷帕霉素對膠質(zhì)瘤細(xì)胞糖代謝的影響及其抗腫瘤機(jī)制研究ResearchontheeffectofRapamycinonglucosemetabolis。hllmanRlioma：ellsanditsantitumormetabolisminUmanRllomaCellSanItSantl-tUmormechanism作者姓名：李春濤學(xué)科專業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)研究方向：外科學(xué)學(xué)院(系、所)：湘雅醫(yī)院指導(dǎo)老師：劉運(yùn)生教授答辯委員會主中南大學(xué)201
2、3年5月原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明。作者簽名：煎日期：蘭亟一年』月墜日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和
3、借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。作者簽名：煎導(dǎo)師簽名自量鄉(xiāng)日期：衛(wèi)年三月墮日雷帕霉素對膠質(zhì)瘤細(xì)胞糖代謝的影響及其抗腫瘤機(jī)制研究摘要：目的：膠質(zhì)瘤是最常見的原發(fā)性腦部腫瘤，且多數(shù)切除后有復(fù)發(fā)可能。目前，針對惡性腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡等方面的研究十分普遍。臨床上使用的抗腫瘤藥物大都是通過抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡來發(fā)揮作用的。P13
4、列Akt／mTOR信號通路在多種惡性腫瘤中過度激活，調(diào)控惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。mTOR是P13K／Akt信號通路下游重要的激酶，參與調(diào)控包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞的生存和增殖。雷帕霉素是mTOR的抑制劑，能通過抑制mTOR的活性，參與調(diào)控P13l淞h，mTOR信號通路在惡性腫瘤細(xì)胞中的作用。然而，關(guān)于雷帕霉素治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤的作用及相關(guān)分子機(jī)制尚未研究清楚。在惡性腫瘤細(xì)胞中，糖酵解水平異常升高，多種糖酵解酶的表達(dá)和活性被過度激活，提示糖酵解途徑可能為抗癌治療提供豐富的靶點(diǎn)。最近有研究報道，mi
5、croRNA．143受mTOR通路調(diào)控，且在多種惡性腫瘤中表達(dá)異常下調(diào)，其靶基因包括糖酵解關(guān)鍵限速酶己糖激酶2(ⅧQ)。然而，關(guān)于mTOR通路、miRNA．143以及糖酵解途徑在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的調(diào)控作用及三者之間的關(guān)系尚不清楚。本研究利用人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251和CHG．5，探索雷帕霉素在增殖、凋亡、糖酵解等多個方面對神經(jīng)膠質(zhì)瘤的調(diào)控作用，并探討相關(guān)的分子調(diào)控機(jī)制。方法：1)用100mM的雷帕霉素分別處理人膠質(zhì)瘤U251和CHG．5細(xì)胞0、6、12、24h，MTT法檢測U251和CHG．5細(xì)胞的增
6、殖能力。2)用100mM的雷帕霉素處理人膠質(zhì)瘤U251和CHG．5細(xì)胞0、6、12、24h，F(xiàn)CM檢測U251和CHG一5細(xì)胞凋亡水平的改變。3)用100mM的雷帕霉素處理人膠質(zhì)瘤U251和CHG一5細(xì)胞0、6、12、24h，WesternBlotting檢測磷酸化的S6激酶蛋白分子的表達(dá)水平。4)用100mM的雷帕霉素分別處理人膠質(zhì)瘤U251和CHG．5細(xì)胞O、6、12、24h，檢測葡萄糖攝取和乳酸分泌的變化。5)用100mM的雷帕霉素分別處理人膠質(zhì)瘤U251和CHG．5細(xì)胞0、6、12、24h
7、，分別檢測己糖激酶、丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶的活性。6)用100mM的雷帕霉素分別處理人膠質(zhì)瘤U251和CHG．5細(xì)胞0、6、12、24h，WesternBlotting分別檢測己糖激酶、丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶的蛋白表達(dá)水平。7)用100mM的雷帕霉素分別處理人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251和CHG．5細(xì)胞0、6、12、24h，RealtimeqRT—PCR檢測miR一143的表達(dá)變化。結(jié)果：1)用100mM的雷帕霉素分別處理神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251和CHG．5細(xì)胞0、6、12、24h，隨著處理時間的延長，細(xì)胞的增殖
8、呈下降的趨勢。III2)用100mM的雷帕霉素分別處理神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251和CHG一5細(xì)胞0、6、12、24h，隨著處理時間的延長，細(xì)胞凋亡呈上升的趨勢。3)用100mM的雷帕霉素分別處理神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251和CHG一5細(xì)胞0、6、12、24h，隨著處理時間的延長，S6K的磷酸化水平呈下降的趨勢，提示mTOR活性受抑制。4)用100mM的雷帕霉素分別處理神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251和CHG-5細(xì)胞0、6、12、24h，隨著處理時間的延長，細(xì)胞葡萄糖攝取和乳酸分泌量呈下降趨勢。5)用100mM的雷
