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《麻疹核蛋白基因在大腸桿菌和家蠶中的表達(dá)及鑒定》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、論文題目：麻疹核蛋白基因在大腸桿菌和家蠶中的表達(dá)及鑒定答辯委員會主席：專鈺永答辯委員會眠]埏整池顰論文答辯日期：溯毒，6一f溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文目錄中文摘要????????????????????????1ABSTRACT???????．?????????????????．?????????．?????．3引言??????????????????????????????????????????。4主要研究路線??????????????????????。8第一章麻疹病毒核蛋白基因的原核表達(dá)及鑒定????????．91．實(shí)驗(yàn)材料?
2、???????????????????????。91．1實(shí)驗(yàn)毒株、載體及菌株????????????????．91．2實(shí)驗(yàn)主要試劑???????????????????。91．3主要實(shí)驗(yàn)溶液的配制：????????????????。91．4常用實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備??????????????????。131．S引物?????????????????????????????。142實(shí)驗(yàn)方法???????????????????????。1S2．1表達(dá)載體構(gòu)建圖???????????????????。152．2麻疹病毒總RNA提取??????
3、??????????152-3一步法RT-PCR擴(kuò)增目的基因?????????????．162．4RT-PCR產(chǎn)物切膠回收????????????????162．5RT-PCR產(chǎn)物與PMDl9-T載體的連接?????????．172．6E．COLI熱擊感受態(tài)細(xì)胞的制備?????????????172．7重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化和藍(lán)白斑篩選試驗(yàn)??????????。182．7．1重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化?????????????????．18溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文2．7．2藍(lán)白斑試驗(yàn)篩選陽性克隆質(zhì)粒???????????182．8重組質(zhì)粒的鑒定????
4、???????????????182．8．1菌落PCR法鑒定????????????????。182．8．2堿法少量快速抽提質(zhì)粒DNA????????????182。8-3重組克隆質(zhì)粒酶切鑒定和測序???????????192．8．4重組質(zhì)粒的測序?????????????????192．9原核表達(dá)載體的構(gòu)建????????????????．202．9．1目的片段與pET-28a(+)載體的連接?????????。2O2．9．2連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化和鑒定??????????????212．10重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)?????????????
5、???212．11檢測分析重組蛋白表達(dá)情況及表達(dá)產(chǎn)物存在形式????．．212．11．1SDS．PAGE電泳分析蛋白表達(dá)情況?????????212．11．2表達(dá)產(chǎn)物存在形式的檢測????????????．232．12重組蛋白的大量表達(dá)????????????????．232．12．1重組蛋白的大量誘導(dǎo)表達(dá)????????????．232．12-2包涵體蛋白的洗滌及變性處理??????????。232。13鎳柱親和層析純化重組蛋白?????????????242．13．1裝填鎳柱????????????????????．242．1
6、3．2Ni+．NTA樹脂預(yù)處理及再生???????????。242．13．3Ni+．NTA樹脂柱純化蛋白?????????????252．14BRADFORD法測定蛋白濃度??????????????252．15WESTERNBLOT鑒定重組蛋白表達(dá)情況?????????26溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文2。16間接酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測重組蛋白抗原性???263．實(shí)驗(yàn)結(jié)果????????．???????????????．。273．1麻疹核蛋白基因的擴(kuò)增????????????????273．2PMDl9-T-MV-NA／PMD
7、l9-T-MV-NB的酶切鑒定??????283．3重組質(zhì)粒PET-MV-NA／PET-MV-NB的鑒定????????．283．4重組蛋白表達(dá)條件優(yōu)化????????????????293．5重組蛋白的純化????????????????????。3O3．6MV-NA蛋白和MV-NB蛋白的WESTERNBLOT鑒定?????313．7BRADFORD法測定蛋白濃度???????????????323．8表達(dá)重組蛋白的間接法ELISA檢測??????????．324．分析與討論?????????????????????????33
8、第二章真核表達(dá)麻疹病毒核蛋白?????????????。361．實(shí)驗(yàn)材料??????????????????????．．361．1實(shí)驗(yàn)質(zhì)粒、病毒、細(xì)胞、菌株和家蠶?????????．361．2主要試劑與工具酶???????????????????3
