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《微小RNA7及長鏈非編碼RNA TUG1在神經(jīng)母細(xì)胞瘤增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制研究.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號：R73密級：公開UDC：610學(xué)校代碼：11065博士學(xué)位論文微小RNA7及長鏈非編碼RNATUG1在神經(jīng)母細(xì)胞瘤增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制研究張桓瑜指導(dǎo)教師董蒨教授學(xué)科專業(yè)名稱兒科學(xué)（小兒外科）論文提交日期2018年4月2日論文答辯日期2018年5月23日答辯委員會主席鄭珊教授微小RNA7及長鏈非編碼RNATUG1在神經(jīng)母細(xì)胞瘤增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制研究摘要第一部分微小RNA7對神經(jīng)母細(xì)胞瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的作用及其機(jī)制研究目的：探尋神經(jīng)母細(xì)胞瘤中微小RNA7（miR-7）表達(dá)水平，明確miR-7在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中生物學(xué)
2、功能并探討其調(diào)控機(jī)制。方法：miRNAMicroArray結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-7在人神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織中低表達(dá)，利用qRT-PCR驗證miRNAMicroArray的結(jié)果。利用脂質(zhì)體分別將miR-7con、miR-7mimics、miR-7inhibitor瞬時轉(zhuǎn)染到人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH和SH-SY5Y兩種細(xì)胞株中，用實時熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染效率。通過細(xì)胞黏附實驗、woundhealingassay和侵襲小室實驗檢測人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-7con、miR-7mimics、miR-7inhibitor后體外侵襲和遷移的能力的
3、變化，裸鼠尾靜脈注射轉(zhuǎn)移瘤動物模型檢測人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y轉(zhuǎn)染miR-7mimics后體內(nèi)侵襲和遷移的能力。利用生物信息學(xué)網(wǎng)站預(yù)測miR-7潛在的靶基因，并應(yīng)用Dual-luciferasegenereportingsystem和蛋白免疫印跡（Westernblot）實驗方法對潛在的靶基因進(jìn)行驗證。然后，利用脂質(zhì)體LipofectamineTM2000分別將si-Scb和CatKsiRNA瞬時轉(zhuǎn)染到神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH和SH-SY5Y兩種細(xì)胞系，利用Western-blot檢測CatK在各組細(xì)胞中的表達(dá)水平，用細(xì)胞黏
4、附實驗、woundhealingassay和侵襲小室實驗檢測神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞體外侵襲和遷移能力的變化。最后，利用脂質(zhì)體LipofectamineTM2000分別將pcDNA3.0、pcDNA3.0-Catk、pcDNA3.0-Catk+miRNAcon和pcDNA3.0-Catk+miR-7mimics瞬時轉(zhuǎn)染到人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH和SH-SY5Y兩種細(xì)胞系，利用Western-blot檢測CatK在各組細(xì)胞中的表達(dá)水平，再次用細(xì)胞黏附實驗、woundhealingassay和侵襲小室實驗檢測神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染后體外侵襲和遷
5、移能力的變化。結(jié)果：實時熒光定量PCR顯示與原位腫瘤組織相比，miR-7在人神經(jīng)母細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)移瘤組織中的表達(dá)降低（p<0.01）；人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH和SH-SY5Y兩種細(xì)胞系在轉(zhuǎn)染miR-7con、miR-7mimics或miR-7inhibitor后Real-timePCR檢測發(fā)現(xiàn)與miR-7con轉(zhuǎn)染組相比，miR-7mimics或miR-7inhibitor轉(zhuǎn)染組中miR-7表達(dá)水平相應(yīng)升高或者降低；在細(xì)胞水平上研究發(fā)現(xiàn)，與對照組相比神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中過表1達(dá)或下調(diào)miR-7后，能夠相應(yīng)的抑制或促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能
6、力（p<0.01）。在裸鼠體內(nèi)水平上研究發(fā)現(xiàn)，miR-7過表達(dá)同樣可以抑制SH-SY5Y細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力(p<0.01)。利用生物信息學(xué)方法篩選出CatK可能為miR-7的靶基因，雙熒光素酶報告系統(tǒng)結(jié)果顯示含有CatK3’UTR熒光報告載體的相對熒光值明顯降低，含有CatK3’UTR-mut的報告載體的相對熒光值與對照組相比沒有影響(p<0.01)。Westernblot結(jié)果表明在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中過表達(dá)miR-7后能夠抑制CatK的表達(dá)，而轉(zhuǎn)染miR-7inhibitor組細(xì)胞中CatK表達(dá)水平顯著升高(p<0.01)。CatK
7、siRNA下調(diào)CatK表達(dá)后同樣可以抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，并且pcDNA3.0-CatK與miR-7mimics共轉(zhuǎn)染后能夠部分逆轉(zhuǎn)miR-7對腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的抑制能力(p<0.01)。結(jié)論：miR-7在人神經(jīng)母細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)移瘤組織中表達(dá)下調(diào)，CatK是miR-7的直接靶基因，miR-7通過抑制CatK的表達(dá)抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的進(jìn)展和惡化。博士研究生：張桓瑜（兒科學(xué)）指導(dǎo)教師：董蒨（教授）關(guān)鍵詞：微小RNA7；神經(jīng)母細(xì)胞瘤；CatK；侵襲；轉(zhuǎn)移2摘要第二部分長鏈非編碼RNATUG1對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖、侵襲和遷移的影響目的
8、：檢測長鏈非編碼RNATUG1（TUG1）在神經(jīng)母細(xì)胞中的表達(dá)情況，探討TUG1在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中對增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力的作用及其機(jī)制。方法：收集35對人神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者臨床標(biāo)本（神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織及瘤旁正常組織），利用
