dna錯配修復(fù)基因muts的高效表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物活性鑒定

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2、-，9-AHAB()(CJRS-T?H?B-，U(BT(B，,V:$IW，X6）摘要將O+I錯配修復(fù)基因3)/4（$Y#5Z1）克隆于分泌型原核表達(dá)載體.>9M$（<[）上，以+端融合5個組氨酸的形式在5*0(,#IO4&（4O>M）中進(jìn)行了P9K誘導(dǎo)表達(dá)。,O,3IK>分析證實有一與預(yù)期分子量相應(yīng)的誘導(dǎo)表達(dá)條帶，其表達(dá)量占全菌蛋白質(zhì)的M#]左右，且表達(dá)蛋白以可溶形式存在。利用固定化金屬離子（+?$[）配體親和層析柱純化目的蛋白，其純度為&%]以上。與含有錯配堿基O+I雙鏈的結(jié)合反應(yīng)證明該蛋白具有特異性識別、結(jié)合含有錯配堿基O+I雙鏈的生物活性。關(guān)鍵詞錯配修復(fù)基因3)/4，表達(dá)，

3、純化，鑒定中圖分類號^:"&文獻(xiàn)標(biāo)識碼I文章編號!%%%3M%5（!$%%$）%#3%#M53%#O+I錯配修復(fù)（S?L0

4、"3O因。近年來的大量研究表明，SS_基因的突變或缺糖苷）均購自,?C0<公司。7_產(chǎn)物純化試劑盒、膠陷將導(dǎo)致復(fù)制后錯配修復(fù)功能的喪失，增加細(xì)胞自回收試劑盒為上海華舜生物工程有限公司產(chǎn)品。$[發(fā)突變的頻率，隨著基因突變的不斷放大積累，使大+?3+9I樹脂購自+(G-C(B公司。寡核苷酸引物由量錯誤信息遍布于整個基因組，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)上海生物工程有限公司合成。其他化學(xué)試劑均系國［&‘!!］生。SE/,蛋白是生物體內(nèi)SS_系統(tǒng)的重要成產(chǎn)分析純試劑。分，具有能單獨識別、結(jié)合含有錯配或未配對堿基核$%$%’培養(yǎng)基：大腸桿菌的培養(yǎng)、轉(zhuǎn)化及蛋白的誘［M，!$，!M］苷酸鏈的特性，是一種極具潛

5、力的研究基因?qū)П磉_(dá)均采用UN培養(yǎng)基。［!4］組多態(tài)性、檢測及定位突變的工具蛋白。本文在$%&實驗方法大腸桿菌中高效表達(dá)了O+I錯配修復(fù)基因3)/4，$%&%$大腸桿菌基因組的提?。簠⒖挤肿涌寺?。同時對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行生物活性鑒定，為建立基于$%&%&7_擴(kuò)增3)/4基因：從K-BN

6、粒：5*0(,#63!$和5*0(,#Oa#!為KIK9K7II9IKIIII9997KI7Mb，下游引物：#b本室保存菌株。.K>S39載體購自2(0-C<公司。IIK7999I99999I999KI997K97IK99I9Mb。7_5*0(,#IO4&（4O>M）及表達(dá)載體.>9M$（<[）由胡勤反應(yīng)體系包括：提取的基因組O+I為模板、適量的收稿日期：$%%$3%43!$，修回日期：$%%$3%53$4?；痦椖浚褐袊茖W(xué)院重大項目資助（+(*6,78!3%53%!）。"通訊作者。9-)："53$:3":54!4&$；;<=："53$:3":54!4&$；>30

7、A+?蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)：將!@"#$%-,101#