枳實(shí)總黃酮在ibs模型大鼠體的藥動(dòng)學(xué)--藥效學(xué)研究

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1、廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是個(gè)人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)特別加以注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明并致謝。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名日期：2口磣年籮月z弓日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解廣州中醫(yī)藥大學(xué)有關(guān)保留使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允

2、許被查閱和借閱。本人授權(quán)廣州中醫(yī)藥大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)印手段保存和匯編本學(xué)位論文。(保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)論文作者簽名燮淪文導(dǎo)師簽名日期：功繹年籮月z弓日，勿乞摘要目的：本論文以枳實(shí)黃酮類成分作為研究藥物，采用冰醋酸灌腸刺激加慢性束縛夾尾方法建立為肝郁脾虛型腸易激綜合征(IBS)大鼠模型，初步探討枳實(shí)總黃酮對(duì)肝郁脾虛型IBS的治療作用。本論文的實(shí)驗(yàn)研究主要分為三部分來(lái)闡明作用機(jī)制：(1)枳實(shí)總黃酮對(duì)肝郁脾虛型IBS大鼠的藥

3、效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究；(2)正常和模型大鼠離體腸道菌群對(duì)枳實(shí)總黃酮的代謝研究；(3)枳實(shí)總黃酮在正常與肝郁脾虛型IBS大鼠體內(nèi)的PK—PD研究。方法：1、肝郁脾虛型IBS大鼠模型建立及藥效指標(biāo)的監(jiān)測(cè)SD大鼠每天早上給予4％的冰醋酸灌腸刺激，連續(xù)14d，于造模第7d開始對(duì)大鼠進(jìn)行束縛夾尾應(yīng)激，造模持續(xù)3周時(shí)間，建立肝郁脾虛型IBS大鼠模型。藥效實(shí)驗(yàn)分為4組：模型組，枳實(shí)總黃酮(ZSZHT)治療組(3g／kg)，陽(yáng)性藥得舒特(Dicetel)治療組(1．5mg／Kg)，正常對(duì)照組。藥物治療1周，測(cè)量不同實(shí)驗(yàn)

4、階段大鼠的體重、排便數(shù)、礦場(chǎng)運(yùn)動(dòng)、內(nèi)臟敏感性、糖水消耗量水平變化，還有血清一氧化氮水平和結(jié)盲腸組織中肥大細(xì)胞(MC)數(shù)目變化。2、腸道菌群藥物代謝模型的建立將枳實(shí)總黃酮藥液分別與新鮮配制的正常及IBS大鼠腸道菌群孵育液在37。C孵化，采用HPLC—UV測(cè)定孵化不同時(shí)間點(diǎn)大鼠腸道菌群液中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、橙皮素的濃度。采用DAS2．1．1軟件對(duì)大鼠體外腸道菌的藥時(shí)曲線進(jìn)行房室模型擬合，計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，考察兩組大鼠離體腸道菌群對(duì)枳實(shí)總黃酮的代謝差異。同時(shí)使用LC-MS技術(shù)檢查枳實(shí)

5、總黃酮腸道菌群代謝產(chǎn)物。3、PK—PD結(jié)合模型的建立建立枳實(shí)3個(gè)黃酮苷(柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷)的LC—MS／MS分析方法學(xué)，測(cè)定正常與模型大鼠給予枳實(shí)總黃酮液后的藥物代謝動(dòng)力學(xué)，同時(shí)用硝酸還原酶法間接測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)血漿NO含量，以NO含量作為藥效指標(biāo)。采用WinNonlin4．0．1軟件進(jìn)行藥物在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)一藥效學(xué)相關(guān)性分析。掛甲當(dāng)日木：1、造模期間，與正常對(duì)照組相比，模型組和治療組大鼠行為學(xué)及內(nèi)臟敏感性有顯著差異，表現(xiàn)為體重增長(zhǎng)緩慢，排便數(shù)顯著增加，糖水吸收量明顯減少，內(nèi)臟敏感性顯著

6、增加。給藥治療1周后，枳實(shí)總黃酮組和得舒特組大鼠行為學(xué)有明顯改善、內(nèi)臟敏感性降低；枳實(shí)總黃酮能提高模型大鼠血清NO的含量，并且減少模型大鼠結(jié)盲腸組織MC的數(shù)目。2、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷在48h內(nèi)能顯著性地被IBS大鼠腸道菌群水解，同時(shí)水解為橙皮素和柚皮素；而正常大鼠腸道菌群對(duì)枳實(shí)總黃酮的水解速度緩慢，生成柚皮素和橙皮素的速度也緩慢。且枳實(shí)總黃酮經(jīng)腸道菌群代謝后檢測(cè)出6個(gè)新的代謝產(chǎn)物。3、枳實(shí)總黃酮在正常和模型大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)過程存在顯著性差異，模型組中3個(gè)黃酮苷的AUC和峰濃度(Cm觚)均

7、遠(yuǎn)低于正常對(duì)照組，消除速率(K)及血漿清除率(CLF)也均明顯高于正常對(duì)照組(P<0．05)；模型組中3個(gè)黃酮苷的達(dá)峰時(shí)間(Tm戤)縮短；枳實(shí)總黃酮效應(yīng)和效應(yīng)室藥物濃度之間符合Sigmoid—Emax藥效學(xué)模型，模型組中Emax、Ec50、Keo及S參數(shù)均發(fā)生改變，盡管與正常對(duì)照組相比沒有顯著性差異。結(jié)論：枳實(shí)總黃酮對(duì)肝郁脾虛型IBS大鼠模型的作用機(jī)制可能是通過升高模型大鼠血清N0的含量，減少結(jié)盲腸組織中MC數(shù)目，從而調(diào)節(jié)大鼠胃腸道運(yùn)動(dòng)及降低內(nèi)臟敏感性；枳實(shí)總黃酮在模型大鼠體內(nèi)、體外藥物代謝動(dòng)力

8、學(xué)均發(fā)生顯著性變化，可能與肝郁脾虛型IBS大鼠腸道菌群生態(tài)構(gòu)造發(fā)生改變有關(guān)；藥物代謝差異促使3個(gè)黃酮苷與模型組中NO受體親合力加大，Emax增加，從而藥效增強(qiáng)。關(guān)鍵詞：道菌群代謝；LC-MS／MS；枳實(shí)總黃酮；腸易激綜合征；PK-PD模型IIStudyonPKandPDiniritabIeboweIsyndromeWithsyndrome?●■■．■■一●一■0’IIVerinvadIngthespIeenotextract’r0111cltrusaurantlumSpeciaIty：Ohine