米曲霉cgmcc5992多酶體系降解秸稈機制研究及mnp發(fā)酵條件優(yōu)化

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1、萬方數(shù)據(jù)米曲霉CGMCC5992多酶體系降解秸稈機制研究及MnP發(fā)酵條件優(yōu)化StudyonthemechanismforstrawstalkdegradationbyAspergillusoryzaeCGMCC5992poly-·enzymesystemsandoptimizationofMnPsynthesiscondition2015年06月萬方數(shù)據(jù)獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的學(xué)位論文,是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下,獨立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中己注明引用的內(nèi)容以外,本論文不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表

2、或撰寫過的作品成果,也不包含為獲得江蘇大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體,均己在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名:習(xí)礴厙≯挎年6月11日萬方數(shù)據(jù)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書江蘇大學(xué)、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所、國家圖書館、中國學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社有權(quán)保留本人所送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔,可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致,允許論文被查閱和借閱,同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研

3、究所將本論文編入《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》并向社會提供查詢,授權(quán)中國學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社將本論文編入《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》并向社會提供查詢。論文的公布(包括刊登)授權(quán)江蘇大學(xué)研究生院辦理。本學(xué)位論文屬于不保密圈。學(xué)位論文作者簽名:躲伽f歲年‘月11日指導(dǎo)教師簽名萬方數(shù)據(jù)江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要秸稈由纖維素、半纖維素和木質(zhì)素組成。木質(zhì)素與半纖維素以共價鍵形式結(jié)合,將纖維素分子包埋在其中,阻礙了纖維素酶、半纖維素酶和纖維素、半纖維素的接觸、因而阻礙了纖維素和半纖維素的降解。因此,木質(zhì)素的降解研

4、究是降解秸稈的前提。本論文以木質(zhì)素和葡萄糖分別作為碳源,其它成分相同的培養(yǎng)基培養(yǎng)本實驗室保存的米曲霉CGMCC5992,利用抑制消減雜交技術(shù)分析基因轉(zhuǎn)錄差異,利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析蛋白質(zhì)翻譯差異,最后優(yōu)化了錳過氧化物酶(MnP)的生長條件。主要結(jié)論如下:(1)將米曲霉在以木質(zhì)素和葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),利用抑制消減雜交技術(shù)對這兩種樣品的差異表達(dá)基因進(jìn)行篩選和鑒定。其中上調(diào)的基因包括谷胱甘肽過氧化物酶、堿性蛋白酶、金屬蛋白酶、泛素、谷氨酰胺酶、甘露聚糖酶、1,3(4).B葡聚糖內(nèi)切酶、細(xì)胞色素P450烷烴

5、羥化酶、小突觸泡蛋白,SNARE蛋白、v.SNARE蛋白、完整的膜蛋白,固定糖脂的表面蛋白、B—l,3.葡聚糖轉(zhuǎn)移酶、尿核苷二磷酸葡萄糖轉(zhuǎn)移酶和熱休克蛋白。這些基因轉(zhuǎn)錄量的增加說明菌體水解秸稈中主要成分和細(xì)胞運輸能力增強,尤其是過氧化物酶活性的增強證明該菌株具有降解木質(zhì)素的能力。下調(diào)的基因包括蛋白激酶、C2H2鋅指蛋白、GTP結(jié)合蛋白、?;o酶A脫氫酶,硬脂酸脫氫酶,磷脂酸胞苷酰轉(zhuǎn)移酶,蘋果酸合成酶,烏頭酸水合酶和細(xì)胞膜ATP酶。這些基因主要負(fù)責(zé)葡萄糖分解代謝,脂質(zhì)合成代謝和能量代謝,這說明在木質(zhì)素作為碳源時糖

6、代謝和脂代謝減弱。(2)蛋白質(zhì)組學(xué)分析得到類似的結(jié)果。將米曲霉在以木質(zhì)素和葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),應(yīng)用差異蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對在這兩種條件下培養(yǎng)的米曲霉表達(dá)的差異蛋白進(jìn)行了分析。我們發(fā)現(xiàn)差異最顯著的蛋白質(zhì)為過氧化物酶。這些結(jié)果證明米曲霉CGMCC5992具有降解木質(zhì)素的能力。(3)以M11P為指標(biāo),通過單因素和響應(yīng)面實驗優(yōu)化了米曲霉固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)的工藝條件。最佳培養(yǎng)基組成為:在稻草培養(yǎng)基中添加O.78g/L果糖、25gm蛋白胨和O.87g/LMgS04時MnP活力最高,在該培養(yǎng)條件下MnP活力最后升至8.74

7、6U/g。結(jié)果表明優(yōu)化后MnP活力顯著升高。實驗證明米曲霉CGMCC5992萬方數(shù)據(jù)米曲霉CGMCC5992發(fā)酵降解秸稈的工藝條件與機制研究在此生長條件下能有效提高M(jìn)11P活力。關(guān)鍵詞:米曲霉CGMCC5992,木質(zhì)素,MnP,差異基因,差異蛋白II萬方數(shù)據(jù)江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文ABSTRACTStrawiscomposedofcellulose,hemicelluloseandlignin.Ligniniscovalentlyassociatedwithhemicellulose.Inaddition,cell

8、uloseisenwrappedinlignin,thathindercellulaseandhemicellulasetocontactwiththem.So,itisdifficulttodegradehemicellulosesandcellulose.Todegradestraw,firstly,itisnecessarytounderstandhowtodegradelign

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