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《產(chǎn)耐高溫糖化酶的黑曲霉菌株誘變選育、發(fā)酵條件優(yōu)化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
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3、temperatureresistantglucoamylaseandstudyingonitscharacteristics作者姓名：梁冬雪領(lǐng)域（方向）：真菌誘變選育及發(fā)酵工程研究指導(dǎo)教師：胡鑫副教授類別：理學(xué)碩士答辯日期：2015年12月4日I*~2*itY:.1t:tfa{]=t:5oot~*R,1~5!~1l:t￥~o1*~*itY:.~~~Jt,~~~*~ffW~~~~A,~~m~*~-:9:.a{]~~B~~B5t~~illfr1ffilJJf~:tta{]~ffi1L1'~&,￡~1<
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5、lucohydrolase)，由曲霉優(yōu)良菌種經(jīng)深層發(fā)酵提煉而成，廣泛應(yīng)用于釀造業(yè)、制糖業(yè)等食品加工業(yè)及抗菌素、有機(jī)酸、氨基酸等發(fā)酵工業(yè)，是世界上產(chǎn)量最大和用途最廣的酶類之一。在玉米精深加工過程中，糖化酶作為關(guān)鍵酶類，被廣泛應(yīng)用。然而，由于加工過程中需要先高溫水解淀粉，然后再降溫達(dá)到糖化酶的最適作用溫度范圍，所以這種反復(fù)的升溫降溫過程浪費(fèi)能源，損耗生產(chǎn)設(shè)備，造成了巨大浪費(fèi)，因此，提高糖化酶的最適作用溫度就可以很大程度地減少生產(chǎn)中的能源消耗。本研究首先從實(shí)驗(yàn)室保藏的一株黑曲霉出發(fā)，通過物理誘變結(jié)合化學(xué)誘
6、變方法，篩選得到一株產(chǎn)耐高溫糖化酶的誘變菌株UD9，其最適催化溫度由原來的57℃提高到67℃，酶活力由42.08kU/mL提高到62.88kU/mL。然后通過響應(yīng)面分析法優(yōu)化了黑曲霉的發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵工藝，最優(yōu)的培養(yǎng)基配方為：玉米淀粉為218g/L，玉米漿+豆餅粉（比例為3：2）為57.7g/L，硫酸鎂為0.27g/L，磷酸氫二鉀0.5g/L，磷酸二氫鉀0.5g/L，硫酸亞鐵0.03g/L；最優(yōu)的發(fā)酵條件：發(fā)酵溫度33.0℃，初始pH=5.0，發(fā)酵5天，轉(zhuǎn)速196r/min。在上述實(shí)驗(yàn)條件下，得到了
7、糖化酶活力的最大值為62.88kU/mL，是優(yōu)化前（51.06kU/mL）的1.2倍。最后本論文對該菌株所產(chǎn)糖化酶進(jìn)行分離純化并探究其酶學(xué)性質(zhì)，最終確定該酶的最適作用溫度為67℃，最適作用pH值為4.5，熱穩(wěn)定性比原始菌株有很大提高，最適溫度下的酶活力由原來的42.08kU/mL提高到62.88kU/mL；熱穩(wěn)定性有很大改變，誘變菌株的熱穩(wěn)定性半衰期高達(dá)75℃保存50min，而原始菌株僅為70℃保存30min；與原始菌株相比，改變不大的酶學(xué)性質(zhì)有最適pH值和金屬離+2+2+子穩(wěn)定性，最適pH值依然為
8、4.5；K、Mg、Ca對該糖化酶的催化活力有促+2+2+2+2+2+進(jìn)作用，而Ag、Hg、Fe、、Cu、Zn、Ba及EDTA對酶活力有不同程度的抑制作用。關(guān)鍵詞：黑曲霉，糖化酶，條件優(yōu)化，酶學(xué)性質(zhì)IVAbstractGlucoamylase,whichiscalledglucosaminesulfohyrolase,isderivedfromaspergillusspecies.Itiswidelyusedinthebrewing,thesugarindustry,f
