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《產(chǎn)酯酶海洋細(xì)菌的選育與菌株eb2的發(fā)酵條件及酶學(xué)性質(zhì)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文產(chǎn)酯酶海洋細(xì)菌的選育與菌株EB一2的發(fā)酵條件及酶學(xué)性質(zhì)的研究摘要微生物酯酶作為重要的工業(yè)用酶，廣泛地應(yīng)用于食品、化工、醫(yī)藥、環(huán)保及軍事等領(lǐng)域。本論文對(duì)產(chǎn)酯酶海洋細(xì)菌進(jìn)行了篩選和鑒定，復(fù)合誘變選育，產(chǎn)酶發(fā)酵條件以及酶學(xué)性質(zhì)的研究。根據(jù)酯酶的基本作用特性和機(jī)理，在初篩和復(fù)篩中添加適當(dāng)?shù)牡孜锖椭甘緞?，?duì)產(chǎn)酯酶海洋細(xì)菌進(jìn)行大量的篩選試驗(yàn)，同時(shí)建立了一種簡(jiǎn)便有效的篩選模型，并從中篩選出一株產(chǎn)酯酶菌株EB．1，產(chǎn)酶活力達(dá)22．8U／Il兒。通過(guò)對(duì)菌株EB．1的形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特征以及16SrI斟A分子分類鑒
2、定相結(jié)合的方法，最終將該菌株鑒定為覷f盯淞s材6f脅var．丹劫弦，．：菌體大小約為(O．6～O．7)岬×(1．5～2．5)岬；革蘭氏染色陽(yáng)性菌；呈桿狀，圓端，單個(gè)或短鏈狀排列；14h后有單芽孢生成，不使菌體明顯膨大；菌落初期為乳白色，表面光滑、粘稠；24h后呈乳黃色，表面干燥；48h后隨時(shí)間的延長(zhǎng)有大量的黑色素產(chǎn)生等。菌株EB．1的各項(xiàng)生理生化特征基本與陸源肋c講淞J甜6舭相同，但也有一些其特有的性質(zhì)，如能同化甘油、耐中鹽以及能在O℃生長(zhǎng)等。為了使菌株EB．1適應(yīng)發(fā)酵生產(chǎn)的需求，對(duì)其進(jìn)行了原生質(zhì)體紫外線復(fù)合誘變。在原生質(zhì)體形成和
3、再生的最佳條件下制備到的原生質(zhì)體，經(jīng)過(guò)紫外線誘變后，對(duì)再生突變菌株進(jìn)行大量篩選，最終獲得產(chǎn)酶穩(wěn)定的菌株EB．2，其產(chǎn)酶活力達(dá)到77．6U／IIlL，比出發(fā)菌株提高3．4倍，從而解決了該菌株規(guī)?；a(chǎn)上的局限性。另外，為了更好地提高產(chǎn)酯酶菌株EB．2發(fā)酵產(chǎn)酶水平，本文對(duì)其發(fā)酵條件進(jìn)行了研究。通過(guò)單因子和正交試驗(yàn)對(duì)碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、誘導(dǎo)劑、培養(yǎng)時(shí)間、起始pH值、接種量和接種齡等發(fā)酵條件的研究，最終確定了菌株EB．2的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基為：蔗糖15．O∥L、蛋白胨10．0∥L、牛肉膏7．5g／L、K2腫04O．5g／L和花生油5．OmUL
4、，此時(shí)的產(chǎn)酶水平達(dá)到了815．40U／InL，比起始條件提高10．5倍；最佳產(chǎn)酶條件為：以種齡16h、6％的接種量、10％的裝液量裝入250mL三角瓶中，35℃、220r／miIl培養(yǎng)22h，最終使菌株的產(chǎn)酶水平達(dá)到了970．33U／InL，總體提高12．5倍。對(duì)初步純化到的酯酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究，其最適pH為10．0，最適溫度上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文為60℃，pH穩(wěn)定范圍為8．O～11．0，熱穩(wěn)定范圍為35℃～60℃；經(jīng)過(guò)SDS．PAGE凝膠電泳和RotoforCeU等電聚焦儀分別測(cè)得其分子量為30．0kDa、pI為4．5；金
5、屬離子中ca2+、M92+、Li+、2rn2+為酯酶的激活劑，Ba2+、Fe3+、Ag+、sP為其抑制劑；酸根離子中Bf、N03‘、P04孓等可以增大酯酶活性；與常見(jiàn)化學(xué)試劑的配伍性較差，受到EDTA的抑制作用嚴(yán)重；在有機(jī)溶劑中，受到丙酮、乙醚、石油醚的激活，但是受到正己烷、異辛烷、氯仿的抑制；其最適底物為甜乙酸萘酯，其次為硝基苯磷酸二鈉鹽和三丁酸甘油酯。該酯酶是一種新型的堿性耐熱酯酶，具有較高的耐堿性和熱穩(wěn)定性，為其工業(yè)化生產(chǎn)提供了便捷，同時(shí)也拓展了其在各個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用范圍。本論文的實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有一定的創(chuàng)新性，填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)在微生物酯酶
6、研究領(lǐng)域的一些空白，對(duì)加速開(kāi)發(fā)我國(guó)海洋微生物資源的利用及其產(chǎn)業(yè)化具有重要的理論和實(shí)際意義。關(guān)鍵詞海洋細(xì)菌，酯酶，鑒定，誘變育種，發(fā)酵條件，酶學(xué)性質(zhì)Ⅱ上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文SelectionandBreedingofEsterase—producingMarineBacteria，F(xiàn)ermentationandSomePropertiesofEsteraseABSTRACTMicrobialester嬲ehasbeenappliedint11efieldsoffood，cheIIlicaliIldus仃y’medicinc，env
7、ironmentandmilita】眵析．a(chǎn)i孤Thestudiesmaildyfocu∞d0nthcscre砌ng鉞ldidemificatio瑪conl】positcmmagenesis，fe加∞mationconditio鵬趾dpropeniesofem了me．B嬲edontlle缸以amentalprincipleandspeciali鑼ofⅡlcIIlicrobiaJesterase，proper蹦lbs仃atesandilldicatorswercusedt0screen廿leesterasc—pfoduciIlgma
8、rimbact耐aiIlthepreliIllina巧鋤d∞conda巧screellillg．AprcciseandrapidscreeIliI培metllodw硒developed．OncSn試nEB-l，砌Ch、Ⅳ嬲isolatI喜d舶mre
