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1、分類號(hào)：密級(jí)：學(xué)校代碼：10165學(xué)號(hào)：201111217遣掌師耗大學(xué)碩士學(xué)位論文@葡萄卜氨基環(huán)丙烷-1-羧酸合酶基因的克隆和表達(dá)分析作者姓名：學(xué)科、專業(yè)：研究方向：導(dǎo)師姓名：初雪鵬遺傳學(xué)植物發(fā)育與分子生物學(xué)侯和勝教授2014年03月學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人承諾：所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所取得的研究成果。論文中除特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含他人和其他機(jī)構(gòu)已經(jīng)撰寫或發(fā)表過的研究成果，其他同志的研究成果對(duì)本人的啟示和所提供的幫助，均已在論文中做了明確的聲明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：狂生!：魚學(xué)位論文版權(quán)的使用授權(quán)書本學(xué)位論
2、文作者完全了解遼寧師范大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，及學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交復(fù)印件或磁盤，允許論文被查閱和借閱。本文授權(quán)遼寧師范大學(xué)，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫并進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文，并且本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。保密的學(xué)位論文在解密后使用本授權(quán)書。學(xué)位論文作?：避指刪讎：j耋鯉簽名日期：年月日遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要ACC合成酶(1一氨基環(huán)丙烷一l一羧酸合酶，ACS)是植物乙烯合成中的關(guān)鍵酶。本研究以歐洲葡萄為材料，以ACS基因?yàn)檠芯繉?duì)
3、象進(jìn)行了研究，結(jié)果如下：1．對(duì)CTAB法、改良SDS法和Trizol法提取葡萄RNA進(jìn)行了比較。結(jié)果表明CTAB法和改良SDS法都能提取到葡萄RNA。前者提取到的RNA質(zhì)量好，無污染和降解；后者則產(chǎn)量高，但有蛋白質(zhì)和DNA的污染，并有些降解；Trizol法無法提取獲得葡萄RNA，可能是受試劑中胍鹽的影響。利用CTAB法從不同組織中提取葡萄RNA，反轉(zhuǎn)錄后克隆得到VvACS3、VvACS4和VvACS53個(gè)基因。對(duì)這3個(gè)基因推導(dǎo)的氨基酸序列進(jìn)行分析。結(jié)果表明：這3個(gè)基因均具有AAT-like保守結(jié)構(gòu)域。且有多處能被磷酸化修飾的位點(diǎn)，說明了
4、VvACS在翻譯后的修飾階段易被磷酸化，可能與ACS活性有關(guān)。將實(shí)驗(yàn)室已克隆到的6個(gè)VvACS基因推導(dǎo)的氨基酸序列與番茄、擬南芥和玉米的ACS蛋白的氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹。結(jié)果顯示：這些VvACS具有不同程度的相似性和同源性。為進(jìn)一步定性研究VvACS基因提供參考。2．對(duì)葡萄葉片進(jìn)行乙烯、脫落酸處理和傷害誘導(dǎo)后，利用實(shí)時(shí)定量PCR對(duì)VvACS5基因相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行研究。發(fā)現(xiàn)外源乙烯和脫落酸都能先促進(jìn)后抑制VvACS5的表達(dá)；傷害處理對(duì)M跚的表達(dá)具有促進(jìn)作用。說明VvACS5能響應(yīng)這些脅迫處理。這一發(fā)現(xiàn)初步證明ACS參與植物對(duì)
5、脅迫的調(diào)控。3．為進(jìn)一步分析VvACS5基因的功能，構(gòu)建了VvACS5基因植物雙元表達(dá)載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化擬南芥。本研究采用了浸花法進(jìn)行轉(zhuǎn)化。通過PCR方法和抗生素篩選初步驗(yàn)證，葡萄VvACS5基因成功的轉(zhuǎn)到擬南芥基因組中。目前獲得了7株VvACS5轉(zhuǎn)基因擬南芥純系植株。轉(zhuǎn)基因擬南芥植株表現(xiàn)出葉片大，苗壯的特點(diǎn)，可能跟VvACS5的表達(dá)有關(guān)。對(duì)歐洲葡萄中ACS基因克隆、序列分析和功能分析等的研究，為闡明VvACS基因參與抗逆性調(diào)控的機(jī)制及其功能提供了重要的理論參考。關(guān)鍵詞：葡萄；擬南芥；ACS基因；實(shí)時(shí)定量PCR；遺傳轉(zhuǎn)化葡萄卜氨基
6、環(huán)丙烷一卜羧酸合酶基因的克隆和表達(dá)分析Cloningandexpressionanalysisofgrape1-aminocyclopropane·-1··carboxylatesynthasegenesAbstractACS(1-aminocyclopropane-l—carboxylatesynthase)isoneofthekeyenzymesinethylenebiosynthesisandpathway．TheACSgenesof附括viniferawerestudiedinthisresearch．Theresultswer
7、easfollows：BycomparingthemethodsofCTAB，improvedSDSandTrizolwhicharecommonlyusedforextractingRNAs．wefoundthattheRNASofgrapecouldbeextractedbyboththeCTABandtheimprovedSDSmethods．High-quality．RNAswithoutproteincontaminationanddegradationwereobtainedbytheCTABmethod，whileahig
8、houtputofgrapeRNAscouldbeextractedwiththeproblemofdegradationandcontaminationsofproteinsandDNA．111egrap
