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6、表1和圖1。從表1和圖1結(jié)果可以看出,對照組的虎杖莖尖生長迅速,并分化出綠色的芽,芽的存活率為95.6%;隨著潮霉素濃度的增高外植體生長減緩,分化出的芽弱小且存活率逐漸降低至23.7%;高濃度潮霉素處理造成植物組織失綠褐化并迅速死亡。當(dāng)潮霉素濃度在4mg/L以下不能有效抑制非轉(zhuǎn)化細(xì)胞的生長,容易造成大量非轉(zhuǎn)化體的逃逸;潮霉素濃度在15mg/L以上時,外植體迅速死亡將影響轉(zhuǎn)化細(xì)胞的正常生長;而潮霉素濃度8mg/L處理既能有效抑制非轉(zhuǎn)化組織的生長,又不至于造成細(xì)胞迅速死亡,所以潮霉素濃度8mg/L是莖尖轉(zhuǎn)化外植體篩選的適宜濃度。2預(yù)培養(yǎng)時間對轉(zhuǎn)化的影響將虎杖莖尖分別
7、預(yù)培養(yǎng)1、2、4和8d,侵染菌液濃度OD600值約0.4,侵染莖尖10min,共培養(yǎng)3d,統(tǒng)計轉(zhuǎn)化后獲得的抗性芽百分率及增殖系數(shù)見表2。結(jié)果表明,適當(dāng)?shù)念A(yù)培養(yǎng)可以提高莖尖的再生分化率。預(yù)培養(yǎng)1d時的再生分化率較低(2.3%),再生芽生長細(xì)弱,不利于潮霉素抗性苗的獲得;預(yù)培養(yǎng)2d的莖尖再生分化率最高(4.7%),再生芽生長健壯;預(yù)培養(yǎng)8d時的再生分化率反而下降(2.4%)。所以選擇2d作為預(yù)培養(yǎng)的時間。3菌液濃度對虎杖遺傳轉(zhuǎn)化的影響將農(nóng)桿菌的濃度OD600稀釋為0.2、0.4、0.6和0.8,侵染預(yù)培養(yǎng)2d的莖尖10min,共培養(yǎng)3d,以轉(zhuǎn)化后獲得的抗性芽百分率及
8、增殖系數(shù)作為評價指標(biāo)(表
