卡介苗初免-dna疫苗加強免疫策略的抗結(jié)核保護效果研究

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1、萬方數(shù)據(jù)卡介苗初免一DNA疫苗加強免疫策略的抗結(jié)核保護效果研究Theprotectiveefficacyof“BCGprime-DNAboosterll’regimenagainsttuberculosis碩士研究生：康涵學(xué)號：10211300003導(dǎo)師：沈芳主任技師范小勇副研究員導(dǎo)師小組成員：吳文娟主任技師DouglasB．Lowrie教授公共衛(wèi)生臨床中心二0一三年四月萬方數(shù)據(jù)復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄lIIIIIIIIILIIIJlllllllllIIHIIllllllllIllIY2704851中文摘要?

2、??????????????????????????????英文摘要???????????????????????????????—1．￡一—jL一日U舌第一部分A985ADNA疫苗的構(gòu)建和制備引言???????????????????????????????材料與方法結(jié)果討論第二部分BCG初免．A985ADNA加強免疫策略的保護效果評價引言???????????????????????????????材料與方法???????????????????????????一結(jié)果???????????????????

3、????????????討論第三部分BCG初免一A985ADNA加強免疫策略的免疫原性分析引言???????????????????????????????材料與方法????????????????????????????結(jié)果???????????????????????????????討論參考文獻???????????????????????????????論文總結(jié)及創(chuàng)新點??????????????????????????一綜述附錄致謝135711131830473823O13456萬方數(shù)據(jù)復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)

4、位論文中文摘要摘要目的制備表達免疫優(yōu)勢抗原A985A的DNA疫苗，以其加強卡介苗(BacillusCalmette．Guerin，BCG)初免的作用，并評價其抗結(jié)核(Tuberculosis，TB)的作用；同時分析疫苗接種后誘導(dǎo)的T細胞應(yīng)答，并探討其與免疫保護的關(guān)系。方法以真核表達載體pVAXI重組表達分枝桿菌抗原A985A，制備不含內(nèi)毒素的DNA疫苗A985ADNA。分別以PBS、BCG、BCG．A985ADNA(BCG初免一A985ADNA加強)、A985ADNA免疫小鼠，在免疫后8周進行結(jié)核分枝桿菌(M

5、ycobacteriumtuberculosis，Mtb)攻擊感染。感染后第l周和第5周，分別計數(shù)感染小鼠脾和肺內(nèi)的荷菌量，同時分析其肺和脾組織勻漿中IFN-y、TNF．Q、IL．2、IL．12、IL一4、IL-6、IL一10和TGF．D等細胞因子的表達，并對第5周小鼠的脾和肺進行病理學(xué)檢查和免疫組化分析，以評價該免疫策略對小鼠的抗結(jié)核保護作用。免疫后第8周，分別制備小鼠的肺和脾單細胞懸液，ELISPOT分析抗原特異的IFN．Y的分泌，流式細胞術(shù)分析T淋巴細胞Mtb特異的IFN-Y、TNF—Q和IL一2的分泌

6、及其CD44、CCR7、CD62L的表達，以評價該免疫策略的免疫原性并分析其與免疫保護效果之間的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果A985A基因成功插入pVAXI質(zhì)粒，測序結(jié)果與GenBank公布的完全一致。免疫小鼠攻擊后第l周，肺CFU(colonyformingunit，菌落形成單位)計數(shù)各組間沒有顯著差異，脾內(nèi)尚不能檢測到Mtb的存在；攻擊后第5周，BCG．A985ADNA組脾和肺內(nèi)的CFU均最低，BCG組與PBS組相比亦有顯著的下降，但A985ADNA組與PBS組、BCG組相比均無顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。病理學(xué)檢查BCG．A98

7、5ADNA組的病理損害也最輕。感染后第1周細胞因子的表達肺和脾幾乎都沒有統(tǒng)計學(xué)差異，第5周IFN-y、IL．2、IL．12、IL．10、TGF．D均為A985ADNA組最高，BCG組次之，BCG．A985ADNA組最低，PBS組與BCG—A985ADNA組相差不大，其他因子組間差異較小。免疫后第8周(未感染)的小鼠CD4T細胞反應(yīng)的評價發(fā)現(xiàn)：PPD特異的IFN-丫分泌細胞BCG組和BCG．A985ADNA組比PBS和A985ADNA多，但兩者間無明顯差異；A985A特異的IFN-7分泌細胞BCG．A985AD

8、NA組則僅比PBS組高。流式細胞術(shù)分析單個細胞水平的IFN吖、TNF．c【及IL．2的表達，BCG．A985ADNA免疫小鼠能產(chǎn)生較高頻率的IL．2+、IL．2+TNF—Oc+、IFN．丫+IL．2+以及IFN．Y+TNF．礦IL．2+多功能CD4T細胞(p