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1、維普資訊http://www.cqvip.com第33卷第2期西部林業(yè)科學Vo1．33No．22004年6月JournalofWestChinaFomst~ScienceJune．2004分子生物學技術在菌根真菌研究中的應用楊濤，徐慧，方德華。，朱教君(1．陸地生態(tài)過程重點實驗室，中國科學院沈陽應用生態(tài)所。遼寧沈陽110016；2．中國科學院沈陽應用生態(tài)所遼寧沈陽110016；3．西南農業(yè)大學資源環(huán)境學院，重慶400716)摘要：隨著生物技術的迅速發(fā)展，以DNA分析技術為基礎的分子生物學技術在菌根真菌研究中得到了廣泛應用。故此對菌根真菌的研
2、究中所采用的DNA分析技術和同工酶分析等技術作了介紹，并綜述了其在菌根真菌分類鑒定、多態(tài)性及親緣關系和菌種持續(xù)性等方面研究中的應用成果，還探討了分子生物學技術在菌根真菌研究中的應用前景。關鍵詞：菌根真菌；分子生物學；DNA分析技術；同工酶技術中圖分類號：S718．81文獻標識碼：A文章編號：1672—8246(2004)02—0094—05菌根是土壤中的菌根真菌菌絲與高等植物的根的關注，同傳統(tǒng)研究方法(如形態(tài)學和解剖學方系形成具有特定形態(tài)結構和功能的共生聯合體，是法)相比，這些新技術表現出了巨大的優(yōu)越性，自然界中普遍存在的一種植物共生現象。
3、與植物共如：使菌根真菌的鑒定再不受其生長階段和形態(tài)的生的真菌從植物體內獲取必要的碳水化合物及其他限制，以此有助于對根部菌根真菌侵染的鑒定和定營養(yǎng)物質，而植物從真菌那里得到所需的營養(yǎng)及養(yǎng)量分析，從而提高了菌根真菌鑒定的準確性。而以分等物質，以此體現互利互助，互通有無的高度統(tǒng)DNA分析技術為基礎的分子生物學技術的引人，一。菌根既有一般植物根系所具備的特征，又有專使菌根研究得到了空前發(fā)展。目前DNA分子標記性真菌所具有的特性。菌根是植物在長期的生存過技術(包括PCR、RFLP、RAPD、AFLP技術)、程中，與菌根真菌一起共同進化的結果。它們具有
4、同工酶分析技術等分子生物學技術技術已廣泛應用擴大宿主植物的吸收面積、增加宿主植物對磷及其于菌根真菌的分類鑒定、分子遺傳、種間及種內親他營養(yǎng)成分的吸收、提高宿主植物抗逆性的功能，緣關系、DNA雜交、菌株持續(xù)性等方面。在森林生態(tài)系統(tǒng)中起重要作用?。根據菌根形態(tài)和解剖學特征的不同，人們將菌根分為3個主要的1菌根真菌研究中的DNA分析技術類型，即外生菌根(Ectomycorrhiza)、內生菌根(Endomycorrhiza)、內外生菌根(Ectendomycorrhi-借助于DNA分析技術，人們可以更深人地探za)。隨著科學研究的深人，菌根的結構
5、和功能已索、鑒定菌根與菌根真菌，甚至可以進行量化研究。逐漸被人們所認識。但菌根真菌同大多數土壤微生近年來，由于引進DNA分析技術，使菌根研究取得物一樣，單從形態(tài)上有時難以區(qū)分，尤其在不同生一些重要進展。菌根真菌DNA分析技術含3個主要長階段，其形態(tài)變異較大；同時，菌根真菌的體外內容，即DNA提取、DNA純化和DNA分析。培養(yǎng)有時也存在困難，特別是內生菌根真菌，在目1．1菌根菌DNA的提取前條件下只能進行活體培養(yǎng)，其不可以脫離寄主而菌根菌DNA的提取一般有兩種不同途徑L6J，生長，這給菌根真菌的研究造成了障礙，妨礙了人一種是采用菌根菌子實體或
6、菌絲體等作為起始材們對菌根根際結構和功能的深人了解。料，從中提取DNA。菌根菌所有DNA的提取都得隨著生命科學的發(fā)展和研究方法的不斷創(chuàng)新，從破碎細胞開始，鑒于菌根真菌和菌根的細胞壁物以分子為基礎的分子生物學技術在各學科領域中得理和化學特性，用于植物或其他微生物DNA的提到了廣泛應用，這一先進技術已引起眾多菌根專家取方法在菌根菌上不能直接應用，需要根據實際情收稿日期：2004一O1—14第一作者簡介：楊濤(1979一)。男，湖北隨州人，碩士研究生，主要從事環(huán)境微生物學方向的研究。維普資訊http://www.cqvip.com第2期楊濤等：分
7、子生物學技術在菌根真菌研究中的應用95況做必要的修改和補充，才能取得滿意的分離效DNA雜交是單鏈DNA(ssDNA)分子間具有高度果。菌根真菌組織細胞和菌絲體細胞的破碎，通常同源性的核苷酸序列間的結合，探針序列被標記，是在液氮或干冰條件下研磨。另一種方法是直接從以用來檢測其與目的DNA結合的情況。采用35S菌根中提取DNA。另外，與植物的DNA提取不或32P標記探針，經放射自顯影技術可以對雜同，在進行菌根和菌根真菌細胞壁的破碎和DNA交產物進行觀察和研究。提取時，通常不加細胞壁裂解酶，以免目的DNA被降解；此外，提取緩沖液中的EDTA(et
8、hylene—2菌根直菌研究與同工酶分析技術diaminetetra—aceticacid，乙二胺四乙酸)濃度不宜過高，否則可能會影響核酸的活性。同工酶幾乎存在于所有生物中，現今
