扶正消癌合劑誘導(dǎo)人肺腺癌a549細胞凋亡的實驗研究

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterApoptosisinducingEffectofFuzhengxiaoaimixtureonhumanlungadenocarcinomaA549cellsByJiyingDuSupervisor：Prof．XiaomingDengCombinedTraditionalChineseandWesternMedicineTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay2013原創(chuàng)性聲明IIIIIIFIIF

2、IIIPIIrIIIIIIY2315153本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者：杜鄉(xiāng)己廷日期：如f弓年歹月2午El學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)

3、可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者：杜名己廷日期：如f弓年歹月2午日摘要扶正消癌合劑誘導(dǎo)人肺腺癌A549細胞凋亡的實驗研究碩士研究生：杜紀英導(dǎo)師：鄧曉明教授鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科河南鄭州450052摘要背景與目的：肺癌是全球范圍內(nèi)發(fā)病率及死亡率最高的惡性腫瘤之一。美國數(shù)據(jù)統(tǒng)計，在2009年美國大概有219440人患有肺癌，而將近159390人死

4、于該疾病，而全球每年約有130萬人死于肺部腫瘤。因肺癌大多發(fā)病隱匿，大部分患者確診時已屬晚期，失去手術(shù)機會。當前，惡性腫瘤的治療主要采用手術(shù)治療、放化療等方法。隨著分子生物學(xué)及藥理學(xué)的發(fā)展，生物治療、靶向治療及多學(xué)科的綜合治療已成為抗腫瘤研究的熱點。而且大量數(shù)據(jù)證實，抗腫瘤化療藥物毒副作用大，且長期用易產(chǎn)生耐藥性等劣勢。近年來中醫(yī)中藥抗腫瘤越來越受到國內(nèi)外醫(yī)藥界的關(guān)注。誘導(dǎo)腫瘤細胞的凋亡視為治療腫瘤疾病的主要目標和手段。扶正消癌合劑是導(dǎo)師多年經(jīng)驗用方，臨床研究表明它能改善晚期肺癌患者的臨床癥狀，增強機體免疫功能，提高生存質(zhì)量等。但是具體作用機制還不明確。本實驗采用血清

5、藥理學(xué)方法，研究扶正消癌合劑對人肺腺癌A549細胞凋亡的影響并探討可能存在的發(fā)生機制，為其臨床應(yīng)用提供可能的理論和實驗依據(jù)。方法：雄性SD大鼠60只隨機分為6組(每組lO只，組間體重?zé)o差別)，分別是扶正消癌合劑低劑量、中劑量和高劑量組，DDP組，中藥聯(lián)合DDP組，生理鹽水組，中藥組按照人與鼠體表面積換算法及血清藥理學(xué)實驗方法，分別給予扶正消癌合劑低、中、高劑量灌胃藥液灌胃，DDP組給予腹腔注射O．5mg／ml的摘要DDP，中藥聯(lián)合DDP組予扶正消癌合劑中劑量灌胃藥液灌胃及腹腔注射0．5mg／ml的DDP，生理鹽水組予0．9％氯化鈉溶液灌胃。均連續(xù)給藥7天，每天2次，每

6、次2ml。末次灌胃后2h后水合氯醛腹腔注射麻醉，無菌條件下腹主動脈采血，分離血清，56℃滅活30min，經(jīng)0．22I-tm過濾除菌，．20℃保存?zhèn)溆?。制備大鼠含藥血清，MTT法檢測扶J下消癌合劑含藥血清對人肺腺癌A549細胞增值的影響。AnnexinV-FITC／PI雙染法流式細胞術(shù)觀察含藥血清對A549細胞凋亡的影響。Western．Blot檢測含藥血清對P53，Bcl．2及Survivin蛋白表達的影響。結(jié)果：1．倒置顯微鏡下觀察，正常A549細胞呈貼壁生長，多為梭形或橢圓形，胞漿透亮飽滿，細胞增殖速度快。扶正消癌合劑含藥血清作用48h后，可見空白對照組細胞狀態(tài)生

7、長良好。而中劑量組部分細胞的形態(tài)變?yōu)閳A形，細胞間隙些許增大，高劑量組和DDP組，細胞體積變小，細胞間隙較寬，少部分細胞出現(xiàn)脫落。觀察到聯(lián)合組的細胞出現(xiàn)脫落，部分細胞腫脹、破碎，呈壞死狀態(tài)。并且藥物作用72h后細胞數(shù)量明顯減少，細胞凋亡更加顯著。2．不同濃度的中藥含藥血清作用于人肺腺癌A549細胞24h、48h、72h，對細胞有明顯的抑制功能。隨著含藥血清藥物濃度的增加、時間的延長，抑制作用則增強，呈現(xiàn)時間及劑量相關(guān)性，并且高濃度組抑制率僅次于DDP組，聯(lián)合組抑制率最高，高達38．68％，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(尸<0．05)。作用96h后，抑制