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《TRAIL對(duì)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、單位代碼10475學(xué)號(hào)104753140921分類號(hào)Q93河南大學(xué)碩士學(xué)位論文TRAIL對(duì)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究學(xué)科、專業(yè)：生物學(xué)、微生物學(xué)研究方向：生物治療藥物研發(fā)申請(qǐng)學(xué)位類別：理學(xué)碩士申請(qǐng)人：陳小燕指導(dǎo)教師：王耀輝副教授二〇一七年六月THEPROTECTIVEEFFECTOFTRAILONHYPOXIA-REOXYGENATIONINJURYOFMYOCARDIALMICROVASCULARENDOTHELIALCELLANDITSPOSSIBLEMECHANISMThesisSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUn
2、iversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceByXiaoyanChenSupervisor:AssociateProf.YaohuiWangJune,2017摘要背景急性心肌梗死（acutemyocardialinfarction,AMI）是一種全球范圍內(nèi)的急性缺血性心臟病，其發(fā)病因素主要是在動(dòng)脈粥樣硬化的基礎(chǔ)上，堵塞冠脈血液循環(huán)，引起局部心肌缺血，造成心肌細(xì)胞的大量死亡。臨床上對(duì)AMI的治療主要是采用溶栓藥物或者直接進(jìn)行冠脈腔內(nèi)手術(shù)。但是，治療AMI之后，通常會(huì)不可避免的發(fā)生心肌
3、缺血再灌注損傷（myocardialischemia/reperfusioninjury，MI/RI），進(jìn)而引起心肌細(xì)胞大量死亡。有研究表明，在I/R中，心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞（myocardialmicrovascularendothelialcell,CMEC）最先受到影響，發(fā)生功能紊亂。內(nèi)皮細(xì)胞具有很強(qiáng)的分泌功能，可以通過分泌多種生物活性物質(zhì)調(diào)節(jié)體內(nèi)的穩(wěn)態(tài)平衡，在維持正常心功能以及損傷后的修復(fù)方面具有重要的作用。腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體（Tumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand，TRAIL）是TNF家族II型跨膜蛋
4、白的一種，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)及免疫應(yīng)答。近年來，人們對(duì)于TRAIL的關(guān)注不再僅僅是其高效的凋亡作用，更多的是其在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮的復(fù)雜生理功能上。大量研究表明，TRAIL在血管病理生理調(diào)節(jié)中有顯著影響，存在潛在的心血管保護(hù)作用。研究證實(shí)，TRAIL對(duì)心血管的保護(hù)作用機(jī)制可能是通過激活磷脂酰肌醇-2激酶/蛋白激酶B/內(nèi)皮型一氧化氮合酶（PI3K/Akt/eNOS）通路來實(shí)現(xiàn)的。eNOS能夠調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞NO的釋放，而NO具有很強(qiáng)的舒血管功能，能夠抑制血管平滑肌的增殖，起到血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用。在AMI早期，血清中TRAIL濃度明顯降低，其含量與心梗的嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)。體內(nèi)外的研究結(jié)果證
5、明，TRAIL對(duì)心血管疾病具有潛在的血管保護(hù)作用，在心肌梗死過程中，微血管內(nèi)皮功能障礙是導(dǎo)致心肌缺血再灌注損傷的主要因素之一。其中AMI患者血清TRAIL濃度的降低是否是對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的一種保護(hù)作用目前尚不清楚。因此，本課題主要是通過研究TRAIL在缺氧-復(fù)氧條件下對(duì)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響，為心血管疾病的治療提供新的作用靶點(diǎn)。I目的本課題主要是從以下幾個(gè)方面進(jìn)行：（1）建立成年大鼠CMEC的分離及培養(yǎng)方法，并對(duì)CMEC進(jìn)行內(nèi)皮細(xì)胞特異性表面抗原鑒定；（2）研究TRAIL在常氧和缺氧-復(fù)氧條件下對(duì)CMEC的作用；（3）探討TRAIL對(duì)CMEC作用的可能機(jī)制。方法（1）采用酶消化法
6、分離培養(yǎng)Wistar雄性成年大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞，鑒定CMEC表面標(biāo)志物第VIII因子相關(guān)抗原和CD31；檢測細(xì)胞增殖曲線和血管形成能力及DR5蛋白的表達(dá)。（2）常氧培養(yǎng)條件下，TRAIL濃度設(shè)定為0、25、50、100ng/ml，利用LDH和MTS檢測TRAIL對(duì)CMEC增殖活力的影響，運(yùn)用Transwell和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測TRAIL對(duì)CMEC遷移能力的改變。（3）利用低氧工作站建立CMEC的缺氧-復(fù)氧模型。LDH和MTS檢測H/R對(duì)CMEC的作用，以及缺氧-復(fù)氧后添加不同濃度TRAIL對(duì)CMEC增殖活力的影響；（4）檢測TRAIL對(duì)H/R作用后CMEC遷移能力和血管形成能力的影響
7、。實(shí)驗(yàn)分組為正常組（Normal）、單純?nèi)毖?復(fù)氧組（H/R）、TRAIL處理組（25，50，100ng/ml），利用Transwell小室和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測CMEC遷移能力的改變，RT-PCR檢測CMEC的黏附分子ICAM-1和VCAM-1的mRNA表達(dá)情況；利用Matrigel基質(zhì)膠檢測CEMC血管形成能力的變化，RT-PCR檢測CMEC細(xì)胞內(nèi)VEGF和Ang-1的mRNA表達(dá)情況；（5）RT-PCR檢測TRAIL對(duì)H/R作用后CMEC炎癥因子IL-1β和
