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1、分類號：R3單位代碼：10343學(xué)號：151006843碩士學(xué)位論文論文題目:廣州管圓線蟲Galectin-1誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究研究生姓名：史曉萌學(xué)科專業(yè)：病原生物學(xué)類型：學(xué)術(shù)型指導(dǎo)教師：黃慧聰教授二O一八年五月溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目:廣州管圓線蟲Galectin-1誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究答辯委員會(huì)主席：江陸斌研究員答辯委員會(huì)成員：張青鋒教授文金生教授論文答辯日期：2018年5月26日溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………4前言…………
2、……………………………………………………7正文……………………………………………………………10第一部分Ac-Galectin-1誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡現(xiàn)象材料與方法…………………………………………………………10結(jié)果………………………………………………………………19分析與討論…………………………………………………………25第二部分Ac-Galectin-1與巨噬細(xì)胞膜上AnnexinA2相互作用材料與方法…………………………………………………………27結(jié)果………………………………………………………………33分析與討論…………………………………………………………3
3、8第三部分Ac-Galectin-1誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的信號通路研究材料與方法…………………………………………………………39結(jié)果………………………………………………………………43分析與討論…………………………………………………………47小結(jié)……………………………………………………………49參考文獻(xiàn)……………………………………………………………50附錄(一)……………………………………………………………54附錄(二)……………………………………………………………55致謝…………………………………………………………………56綜述：寄生蟲半乳糖凝集素的研究進(jìn)展……
4、……………………57獨(dú)創(chuàng)性聲明…………………………………………………………65溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文廣州管圓線蟲Galectin-1誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究中文摘要廣州管圓線蟲病(Angiostrongyliasis)是由于感染廣州管圓線蟲(Angiostrongyluscantonensis，Ac)而引起的。廣州管圓線蟲病并作為一種重要的人獸共患寄生蟲疾病，主要發(fā)生在中國、東南亞和南太平洋地區(qū)，該病可引起嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染癥狀，嚴(yán)重者可導(dǎo)致癱瘓或死亡。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)Ac-Galectin-1在廣州管圓線蟲生長發(fā)育階段發(fā)揮著重要的作用，是構(gòu)成蟲體
5、體壁的重要成分，促進(jìn)幼蟲發(fā)育成成蟲；Ac-Galectin-1可以通過抑制IFN-γ，IL-5分泌發(fā)揮免疫抑制作用，Ac-Galectin-1還促進(jìn)Treg細(xì)胞聚集，發(fā)揮免疫下調(diào)作用。半乳糖凝集素在細(xì)胞內(nèi)外均可以發(fā)揮其生物學(xué)功能，當(dāng)分泌到胞外時(shí)，主要發(fā)揮凝集素的功能，包括細(xì)胞-細(xì)胞、細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用，細(xì)胞活化，細(xì)胞自噬，細(xì)胞凋亡和細(xì)胞因子分泌等。由于半乳糖凝集素可以和細(xì)胞膜上的多種糖蛋白受體形成不同類型的晶格結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致不同的跨膜信號通路被激活，因此，半乳糖凝集素可以廣泛參與調(diào)節(jié)多方面的生物學(xué)過程。但廣州管圓線蟲Galectin-1的功能研究未見報(bào)
6、道。根據(jù)廣州管圓線蟲的生活史，廣州管圓線蟲幼蟲進(jìn)入人體后會(huì)有一個(gè)階段存活在血液里，最終到達(dá)腦脊液中。具有免疫調(diào)控作用的廣州管圓線蟲的分泌組分在免疫應(yīng)答中的作用值得深入研究，巨噬細(xì)胞作為抗原提呈細(xì)胞和非特異性免疫細(xì)胞，它們在感染免疫中的快速動(dòng)員及Ac-Galectin-1對其的作用直接影響免疫應(yīng)答的發(fā)生發(fā)展。由于外周血來源的單核巨噬細(xì)胞較難獲取、獲取細(xì)胞數(shù)量較少以及血液來源存在個(gè)體差異，因此我們采用THP-1來進(jìn)行研究。本實(shí)驗(yàn)以經(jīng)過佛波酯刺激的THP-l細(xì)胞分化為貼壁的巨噬細(xì)胞為研究對象，旨在通過觀察Ac-Galectin-1對THP-1的作用及具體機(jī)制，為廣州
7、管圓線蟲侵入后其分泌蛋白的免疫調(diào)控作用的研究提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。目的1.鎳柱親和層析方法純化得到廣州管圓線蟲Galectin-1重組蛋白；2.Ac-Galectin-1作用于THP-1來源的巨噬細(xì)胞，觀察凋亡現(xiàn)象及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)；3.篩選與驗(yàn)證與Ac-Galectin-1相互結(jié)合的THP-1細(xì)胞膜表面受體蛋白；4.探究Ac-Galectin-1誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的相關(guān)信號通路蛋白，揭示廣州管圓線蟲Galectin-1重組蛋白誘導(dǎo)該細(xì)胞凋亡的相關(guān)機(jī)制。方法1.Ac-Galectin-1蛋白純化及Ac-Galectin-1誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的檢測1溫州醫(yī)科大學(xué)碩士
8、學(xué)位論文重組廣州管圓線蟲Galecti
