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1、江南大學碩士學位論文太湖水華藍藻中藻藍蛋白的富集分離姓名：高瑾申請學位級別：碩士專業(yè)：化學工藝指導教師：崔正剛20090701摘要摘要：太湖水華藍藻主要由銅綠微囊藻、水華魚腥藻和水華束絲藻等藻類組成，是太湖流域的夏季主要污染物之一。從水華藍藻中提取蛋白質、多糖等有價值物質，為治理提供了一條變廢為寶、提高綜合治理效益的新的有效途徑。藻藍蛋白是藍藻捕光色素復合體中重要的成分之一，可作為天然色素、熒光標記物，還具有一定的藥用價值。本論文以太湖水華藍藻為對象，以其中的藻藍蛋白為提取目標，系統(tǒng)研究了富集分離過程，主要研究內容如下：1．采用單因素掃描和全因子設計響應面優(yōu)化方法
2、獲得薄層層析微囊藻毒素MC．LR、MC—RR的展開劑體系，溶劑比例為三氯甲烷：甲醇：水=65：25：2。MC．LR、MC．RR的展開斑點通過碘蒸氣顯色的目測檢出最低濃度為1mg·L～。薄層色譜掃描法檢出的MC．LR、MC—RR最低濃度為0．00lmg·L～。MC．LR、MC．RR的色譜掃描峰面積與其濃度在0．05．10mg·L以濃度范圍內呈線性關系，檢測準確度達95％以上。2．破碎藍藻細胞的最適方法為反復凍融法，所需的最佳條件為：每0．1g藍藻細胞(干重)加15mL水，于．20℃和37。C間反復凍融5次，獲得的蛋白含量為14％。蛋白沉淀的最適經典方法為硫酸銨鹽析沉
3、淀法，條件為兩步鹽析，破壁上清液先用20％飽和度的硫酸銨鹽析，離心取上清。然后再用60％飽和度的硫酸銨鹽析，離心取沉淀，復溶后蛋白得率為78．32％，光譜純度達到0．32。鹽析后的蛋白質溶液經薄層層析檢測出微量的微囊藻毒素MC．LR，MC—RR。3．靜態(tài)吸附實驗表明實驗室自制的JDN．3型樹脂在吸附蛋白和選擇性吸附藻藍蛋白的性能上較市售的717，732樹脂和羥基磷灰石好。JDN．3型樹脂性能較穩(wěn)定，有良好的重復使用性能。離子交換層析實驗表明用0．2mol·L。1NaCl以0．5mL·mino的流速洗脫能將吸附在JDN．3型樹脂上的藻蛋白較為充分的解析下來，并能提高
4、藻藍蛋白的光譜純度。關鍵詞：太湖水華藍藻，藻藍蛋白，微囊藻毒素，吸附樹脂，富集分離AbstractCyanobactedabloominTaiLake，mainlycomposedofMicrocystisaeruginosa,Anabaenaflos．aquaeandAphanizomenonflos．aquae，isoneofthemainpollutantsinTaiLakeinsummer．However,theproteins，polysaccharidesandothercomponentscontainedincyanobacteriaarevalu
5、able．Forexample，phycocyanin，oneofthecomponentincyanobacteriabloomisalight-harvestingcomponentwhichCanbeusedasnaturalpigment，fluorescentmarkerandisvaluableinmedicinetreatment．，nlesuccessfulseparationofthesevaluablecomponentsfromcyanobactefiabloomisthereforesignificantforchangingthewast
6、etovaluablematerials．Inthisstudy,theseparationofphycocyaninfromcyanobacteriabloominTaiLakehadbeeninvestigatedsystematicallyandthefollowingconclusionscouldbedrawn：1．IntheinvestigationofdetectionofMC．LR(Microcystin．LR)andMC．RR(Microcystin—RR)bythinlayerchromatography,theoptimumdevelopin
7、gsolventWasfoundt0beamixtureoftrichloromethane．methanolandwaterinavolumeratioof65：25：2bysinglefactortestingandresponsesurfaceanalysis．ByvisualobservationthelowestconcentrationofMC—LRandMC—I之Rusingiodinedevelopmentcouldbedeterminedaslmg’L～，whereasusingTLC-scanning．itcouldbeaslowas0．001
8、mg·L～
