chi-mirna-4110對(duì)奶山羊smad2基因靶向調(diào)控作用的研究

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1、分類號(hào)：S814.8學(xué)校代碼：10712UDC：636.3研究生學(xué)號(hào)：20丨3050568密級(jí)：公開灶農(nóng)林對(duì)教大學(xué)2015屆全日制碩士專業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文chi-miRNA-4110對(duì)奶山羊Smad2基因靶向調(diào)控作用的研究類型農(nóng)業(yè)推廣碩士領(lǐng)域、方向養(yǎng)殖研究生雷穎楠導(dǎo)指教師曹斌云教授兀成時(shí)間2015.5中國陜西楊凌研究生學(xué)位論文的獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明：所呈交的全日制碩士專業(yè)學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行的研究工作及取得的研究結(jié)果；論文中的研究數(shù)據(jù)及結(jié)果的獲得完全符合學(xué)?！蛾P(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)

2、術(shù)道德的暫行規(guī)定》，如果違反此規(guī)定，一切后杲與法律責(zé)任均由本人承擔(dān)。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究結(jié)果，也不包含其他人和自己本人已獲得西北農(nóng)林科技大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同事對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文的致謝中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：時(shí)間：2啪年（月2日導(dǎo)師指導(dǎo)研究生學(xué)位論文的承諾本人承諾:我的全日制碩士專業(yè)學(xué)位研究生t蘇、雄所呈交的碩士學(xué)位論文是在我指導(dǎo)下獨(dú)立開展研究工作及取得的研究結(jié)果，屬于我

3、現(xiàn)崗職務(wù)工作的結(jié)果，并嚴(yán)格按照學(xué)?！蛾P(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定》而獲得的研究結(jié)果。如果違反學(xué)?！蛾P(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定》，我愿接受按學(xué)校有關(guān)規(guī)定的處罰處理并承擔(dān)相應(yīng)導(dǎo)師連帶責(zé)任。導(dǎo)師簽名:時(shí)間：>丨玉年《月1?日關(guān)于研究生學(xué)位論文使用授權(quán)的說明本學(xué)位論文的知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬西北農(nóng)林科技大學(xué)。本人同意西北農(nóng)林科技大學(xué)保存或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的紙質(zhì)版和電子版，允許論文被查閱和借閱；同意西北農(nóng)林科技大學(xué)將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容授權(quán)匯編錄入《中國優(yōu)秀碩士學(xué)位論

4、文全文數(shù)據(jù)庫》進(jìn)行出版，并享受相關(guān)權(quán)益。本人保證，在畢業(yè)離開（或者工作調(diào)離）西北農(nóng)林科技大學(xué)后，發(fā)表或者使用本學(xué)位論文及其相關(guān)的工作成果時(shí)，將以西北農(nóng)林科技大學(xué)為第一署名單位，否則，愿意按《中華人民共和國著作權(quán)法》等有關(guān)規(guī)定接受處理并承擔(dān)法律責(zé)任。任何收存和保管本論文各種版本的其他單位和個(gè)人(包括研究生本人)未經(jīng)本論文作者的導(dǎo)師同意，不得有對(duì)本論文進(jìn)行復(fù)制、修改、發(fā)行、出租、改編等侵犯著作權(quán)的行為，否則，按違背《中華人民共和國著作權(quán)法》等有關(guān)規(guī)定處理并追究法律責(zé)任。(保密的學(xué)位論文在保密期限內(nèi)，不得以任何方

5、式發(fā)表、借閱、復(fù)印、縮印或掃描復(fù)制手段保存、匯編論文）研究生簽名：雪棘拂時(shí)間：2。以年（月Z曰chi-miRNA-4110對(duì)奶山羊Smad2基因靶向調(diào)控作用的研究摘要MicroRNA（miRNA）是一類重要的非編碼小RNA分子，在動(dòng)物繁殖過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。miRNA通過調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)影響動(dòng)物的繁殖機(jī)能。為進(jìn)一步揭示miRNA對(duì)奶山羊生殖機(jī)能的調(diào)控作用，本研究在前期構(gòu)建的多羔（3-5羔/胎）和單羔（1羔/胎）奶山羊發(fā)情期卵巢差異表達(dá)miRNA文庫的基礎(chǔ)上，以關(guān)中奶山羊?yàn)檠芯繉?duì)象，利用Realtim

6、e-PCR檢測(cè)chi-miR-4110在多羔和單羔奶山羊發(fā)情期卵巢中的差異表達(dá)水平，并利用生物信息學(xué)、熒光素酶載體和Westernblotting等技術(shù)驗(yàn)證chi-miR-4110靶基因及其對(duì)靶基因的調(diào)控作用，為提高奶山羊產(chǎn)羔率提供試驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。本研究獲得的主要結(jié)果如下：1、chi-miR-4110在多羔和單羔奶山羊卵巢組織中的表達(dá)水平利用生物信息學(xué)，從卵巢差異表達(dá)miRNA文庫中篩選對(duì)繁殖性狀有重要調(diào)控作用且差異表達(dá)顯著的chi-miR-4110，采用Realtime-PCR檢測(cè)chi-miR-41

7、10在多羔和單羔奶山羊卵巢中的相對(duì)表達(dá)量顯示，chi-miR-4110在多羔奶山羊卵巢中的表達(dá)量極顯著（P<0.01）高于單羔奶山羊卵巢中的表達(dá)量，表明chi-miR-4110可能對(duì)奶山羊產(chǎn)羔性狀有重要的調(diào)控作用。2、chi-miR-4110靶基因的預(yù)測(cè)及驗(yàn)證通過應(yīng)用生物信息學(xué)對(duì)chi-miR-4110的靶基因進(jìn)行綜合分析，篩選出與卵巢發(fā)育相關(guān)的靶基因Smad2。構(gòu)建含有Smad2-3'UTR區(qū)的雙熒光素酶載體，與chi-miR-4110共轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞中，利用熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)熒光素酶的活性。結(jié)果顯

8、示與chi-miR-4110共轉(zhuǎn)染的試驗(yàn)組的熒光素酶活性顯著低于陰性對(duì)照，表明chi-miR-4110通過與Smad2-3'UTR相互作用導(dǎo)致熒光素酶活性降低，初步鑒定Smad2為chi-miR-4110的靶基因。3、chi-miR-4110對(duì)靶基因的調(diào)控將chi-miR-4110和control分別轉(zhuǎn)染到奶山羊卵巢顆粒細(xì)胞中，利用Realtime-PCR和Westernblotting檢測(cè)Smad2mRNA以及