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《mirna-1296 和mirna-370對(duì)奶山羊mthfr基因表達(dá)的調(diào)控作用研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、分類(lèi)號(hào)：S814.8學(xué)校代碼：10712UDC：636.3研究生學(xué)號(hào)：201305054-密級(jí)：公開(kāi)灶衣林科長(zhǎng)大學(xué)i2015屆全日制碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文miRNA-1296和miRNA-370對(duì)奶山羊MT/ffT?基因表達(dá)的調(diào)控作用研究類(lèi)型農(nóng)業(yè)推廣碩士領(lǐng)域、方向養(yǎng)殖研究生高特仰指導(dǎo)教師曹斌云教授完成時(shí)間2015.5中國(guó)陜西楊凌研究生學(xué)位論文的獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明：所呈交的全日制頌士專(zhuān)業(yè)學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行的研究工作及取得的研究結(jié)果；論文中的研究數(shù)據(jù)及結(jié)果的獲得完全符合學(xué)校《關(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定》，如果違反
2、此規(guī)定，一切后果與法律責(zé)任均由本人承擔(dān)。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致■謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究結(jié)果，也不包含其他人和自己本人已獲得西北農(nóng)林科技大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同事對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文的致謝中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研究生簽名：、^f為眾時(shí)間：年〈月>5日導(dǎo)師指導(dǎo)研究生學(xué)位論文的承諾本人承諾：我的全日制碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)位研究生_^7_1^^_所呈交的碩士學(xué)位論文是在我指導(dǎo)下獨(dú)立開(kāi)展研究工作及取得的研究結(jié)果，屬于我現(xiàn)崗職務(wù)工作的結(jié)果，并嚴(yán)格按照學(xué)?！蛾P(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技
3、大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定》而獲得的研究結(jié)果。如果違反學(xué)?！蛾P(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定》，我愿接受按學(xué)校有關(guān)規(guī)定的處罰處理并承擔(dān)相應(yīng)導(dǎo)師連帶責(zé)任。關(guān)于研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文使用授權(quán)的說(shuō)明本學(xué)位（畢業(yè)）論文的知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬西北農(nóng)林科技大學(xué)。本人同意西北農(nóng)林科技大學(xué)保存或向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的紙質(zhì)版和電子版，允許論文被查閱和借閱；同意西北農(nóng)林科技大學(xué)將本學(xué)位（畢業(yè)）論文的全部或部分內(nèi)容授權(quán)匯編錄入《中國(guó)優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》進(jìn)行出版，并享受相關(guān)權(quán)益。本人保證，在畢業(yè)離開(kāi)（或者工作調(diào)離）西北農(nóng)林科技大學(xué)后，發(fā)表或者使用本學(xué)
4、位（畢業(yè)）論文及其相關(guān)的工作成果時(shí)，將以西北農(nóng)林科技大學(xué)為第一署名單位，否則，愿意按《中華人民共和國(guó)著作權(quán)法》等有關(guān)規(guī)定接受處理并承擔(dān)法律責(zé)任。任何收存和保管本論文各種版本的其他單位和個(gè)人(包括研究生本人)未經(jīng)本論文作者的導(dǎo)師同意，不得有對(duì)本論文進(jìn)行復(fù)制、修改、發(fā)行、出租、改編等侵犯著作權(quán)的行為，否則，按違背《中華人民共和國(guó)著作權(quán)法》等有關(guān)規(guī)定處理并追究法律責(zé)任。(保密的學(xué)位論文在保密期限內(nèi)，不得以任何方式發(fā)表、借閱、復(fù)印、縮印或掃描復(fù)制手段保存、匯編論文）研究生簽名：私I介了時(shí)間：年玄月巧曰時(shí)間：>〇丨t年立月巧日miRNA-1296和miRNA-3
5、70對(duì)奶山羊MTHFR基因表達(dá)的調(diào)控作用研究摘要MTHFR是一種黃素蛋白，在葉酸代謝過(guò)程中起到限速作用，而MTHFR的表達(dá)可能會(huì)影響葉酸代謝繼而影響乳蛋白合成。miRNA與靶基因的結(jié)合可能會(huì)因靶基因3'UTR結(jié)合位點(diǎn)處的突變而發(fā)生改變，進(jìn)而影響基因的表達(dá)。本課題組前期的研究結(jié)果表明，奶山羊MTHFR-3'UTR存在c.2494G>A突變。為研究MTHFR基因?qū)θ榈鞍缀铣勺饔玫挠绊懀瑢ふ矣绊慚THFR基因表達(dá)的miRNA顯得尤為重要。本研究利用生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)miRNA-1296和miRNA-370能夠與野生型（2494G）MTHFR-3'UTR結(jié)合。
6、為了驗(yàn)證c.2494G>A突變對(duì)miRNA結(jié)合位點(diǎn)的影響，本研究克隆了野生型和突變型（2494A）MTHFR-3'UTR，構(gòu)建野生型和突變型psiCHECK?-2-MTHFR-3′UTR雙熒光素酶報(bào)告載體。通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組載體和miRNAmimics共轉(zhuǎn)染到乳腺上皮細(xì)胞中，檢測(cè)雙熒光素酶的相對(duì)表達(dá)量。將miRNAmimics單獨(dú)轉(zhuǎn)染到乳腺上皮細(xì)胞中，檢測(cè)MTHFR蛋白的表達(dá)。主要研究結(jié)果如下：1、奶山羊MTHFR-3'UTR區(qū)的克隆、測(cè)序分析及重組載體的構(gòu)建利用奶山羊基因組克隆出野生型（2494G）和突變型（2494A）MTHFR-3'UTR，全
7、長(zhǎng)為314bp。構(gòu)建野生型和突變型psiCHECK?-2-MTHFR-3′UTR雙熒光素酶報(bào)告載體，并通過(guò)測(cè)序和雙酶切法鑒定。2、奶山羊乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定采集不同基因型的奶山羊乳腺組織（野生型和突變型），利用組織塊貼壁法培養(yǎng)奶山羊乳腺上皮細(xì)胞，經(jīng)過(guò)3-5次傳代得到純化的奶山羊乳腺上皮細(xì)胞，并對(duì)培養(yǎng)的乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行鑒定。3、miRNA對(duì)野生型和突變型重組載體熒光素酶表達(dá)的影響將重組載體psiCHECK?-2-MTHFR-3′UTR與miR-370、miR-1296通過(guò)脂質(zhì)體共轉(zhuǎn)染奶山羊乳腺上皮細(xì)胞，檢測(cè)熒光素酶的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果顯示，用miRNA
8、-370與重組載體共同轉(zhuǎn)染乳腺上皮細(xì)胞時(shí)，psiCHECK?-2-MTHFR-3′UTR-24
