klf4在膀胱尿路上皮癌中的表達及意義

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1、授予單位代碼10089學號或申請?zhí)?3851HebeiMedicalUniversity碩士學位論文在職科學學位KLF4在膀胱尿路上皮癌中的表達及意義研究生：曾博文導師：李珅教授趙釵教授專業(yè)：外科學二級學院：石家莊市第一醫(yī)院2015年3月河北醫(yī)科大學學位論文使用授權及知識產(chǎn)權歸屬承諾本學位論文在導師(或指導小組)的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研宄所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位主要內容相關的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科

2、大學，試驗材料原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權均歸河北醫(yī)科大學所有。否則，承擔相應法律責任。河北醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研宄成果，除了文中特別加以標注和致謝等內容外，文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表和撰寫的研宄成果，指導教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負。[rpg'oj研究生簽名:導師簽章：中文摘要KLF4在膀胱尿路上皮癌中的表達及意義摘要膀胱癌在世界范圍內有較高的發(fā)病率，在所有惡性腫瘤中排名第五位。同時膀胱腫瘤也是泌尿外科發(fā)病率及死亡率最高的惡

3、性腫瘤，其發(fā)病率逐年上升，嚴重威脅人類健康。超過95%的膀胱惡性腫瘤來源于尿路上皮細胞。膀胱癌根據(jù)其生長方式分為淺表性及浸潤性生長，在所有膀胱癌病例中，大部分為腔內生長的淺表性腫瘤，目前廣泛應用的治療方式主要為經(jīng)尿道膀胱腫瘤切除術，即使輔以膀胱灌注化療，其復發(fā)率仍然很高。術后復查進展為浸潤型膀胱癌的幾率約為14~45%。手術治療浸潤性膀胱癌主要術式為膀胱部分切除及根治性腫瘤切除術，手術范圍廣，部分患者需終身攜帶造瘺管，嚴重影響患者生活質量。且術后復發(fā)率仍較高，約為50~70%，50%的患者術后4~5年

4、內死亡。因此膀胱癌的早期診斷對提高治療效果降低腫瘤死亡率有重要意義。目的：本實驗通過對正常膀胱粘膜組織及臨床病理因素不同的膀胱尿路上皮癌組織標本進行研究，實驗采用免疫組化SP法及免疫印記WesternBlotting法，測定KLF4在正常膀胱粘膜組織及不同臨床病理因素膀胱尿路上皮癌組織中的表達情況，結果進行統(tǒng)計學分析，目的在于揭示KLF4蛋白在膀胱尿路上皮癌組織中的表達情況，及KLF4在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展及不同臨床病理因素之間的關系。方法：組織標本來源：收集2013年11月~2015年1月石家莊市第一醫(yī)

5、院及解放軍第260醫(yī)院泌尿外科住院患者手術切除的51例膀胱癌組織及30例正常膀胱組織。51例膀胱癌組織均經(jīng)病理證實為尿路上皮癌，根據(jù)2004年WHO膀胱癌分級標準，高級別21例，低級別30例，男性33例，女性18例，年齡24~79歲，平均年齡55.0歲。所有病例均為初次手術，術前未經(jīng)任何放療、化療及免疫治療。用于免疫組織化學SP法的標本（包括51例膀胱癌組織及30例正常膀胱粘膜組織）均經(jīng)10%甲醛固定，固體石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片。用于免疫印記westernblotting法的標本（包括30例膀胱癌

6、組織及30例正常膀胱粘膜組織）于手術切除后立即于無菌條件下放入消毒后的Eppendof管內，放入液氮中運送至-70℃冰箱凍1中文摘要存?zhèn)溆谩?免疫組織化學SP法（兩步法）：應用免疫組化SP法檢測51例膀胱尿路上皮癌組織和30例正常膀胱黏膜組織的鋅指轉錄因子KLF4蛋白的表達情況。計算KLF4在正常膀胱黏膜組織及不同臨床病理因素的膀胱尿路上皮癌組織的表達水平，制成表格并填充數(shù)據(jù)，應用SPSS19.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計實驗結果，比較KLF4在不同病理因素的膀胱尿路上皮癌組織和正常膀胱黏膜組織的表達情況，同時應用

7、統(tǒng)計學方法驗證KLF4蛋白在膀2胱尿路上皮癌組織不同臨床病理參數(shù)間的表達差異。以X檢驗統(tǒng)計實驗結果，以P<0.05作為有顯著統(tǒng)計學差異。2WesternBlotting檢測:首先制備SDS-PAGE電泳凝膠，制備正常膀胱黏膜組織及膀胱尿路上皮癌組織標本，取上清液作為樣品，進行蛋白含量測定。將KLF4蛋白樣品按比例加入SDS上樣緩沖液，100℃煮沸至蛋白變性，上樣，室溫60VSDS-PAGE穩(wěn)壓電泳持續(xù)3h。將蛋白轉至PVDF膜。將PVDF膜置于5%脫脂奶粉封閉，進行一抗孵育及二抗孵育，最后用化學發(fā)光法

8、檢測蛋白。用Westernblotting成像分析系統(tǒng)軟件對結果進行定量分析。結果：免疫組化結果表明：KLF4在膀胱尿路上皮癌組織和正常膀胱粘膜組織中均有表達，KLF4大多呈彌漫失極性表達，呈棕黃色顆粒，位于胞質內，彌散分布，部分細胞出現(xiàn)胞核著色。KLF4在正常膀胱粘膜組織的陽性表達率為96.7%，在膀胱癌組織的陽性表達率為51.0%，KLF4在正常膀胱黏膜組織的表達強度明顯高于膀胱尿路上皮癌組織。非浸潤性膀胱癌組織的KLF4表達強度明顯高于浸潤性膀胱癌