水通道蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表達及意義

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1、新疆醫(yī)科大學醫(yī)學碩士學位論文進行電泳約90min,轉(zhuǎn)印到PVDF膜上(300mA,90min),5%脫脂奶粉BSA-TBST4度封閉過夜,加入鼠抗人多克隆anti-AQP1抗體(1∶500稀釋),室溫孵育120min,然后加入HRP標記的山羊抗鼠IgG(1∶1000稀釋),室溫孵育120min,TBST洗滌3次,每次10min,3,3′-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。染色條帶被掃描后應用圖像分析系統(tǒng)測定灰度值,計算每組患者的灰度值,比較兩組的差別。3統(tǒng)計學處理將所有資料采用excel軟件建立數(shù)據(jù)庫。實驗數(shù)據(jù)輸入SPSS17.0軟件數(shù)據(jù)庫中,由于本實驗結(jié)果服從正態(tài)分布,因此我們首先經(jīng)方

2、差齊性檢驗,如方差齊則采用兩獨立樣本均數(shù)比較的t檢驗,如方差不齊可選用秩和檢驗,檢驗水準a=0.05,P<0.05代表有統(tǒng)計學意義。6新疆醫(yī)科大學醫(yī)學碩士學位論文結(jié)果1免疫組織化學法所有切片染色背景清晰,陰性對照不著色。AQP1陽性反應呈棕黃色,主要表達于膀胱黏膜微血管和小動脈的內(nèi)皮細胞及腫瘤細胞。對照組:AQP1主要表達在正常膀胱黏膜微血管和小動脈的內(nèi)皮細胞的胞漿和胞膜(圖1)。膀胱尿路上皮癌組:AQP1主要表達于腫瘤微血管內(nèi)皮細胞、腫瘤細胞胞漿內(nèi)和胞膜上(圖2)。圖1AQP1在正常膀胱組織中的表達圖2AQP1在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(400×)(400×)AQP2陽性反應呈

3、棕黃色,主要存在正常膀胱組織(圖3)及膀胱尿路上皮癌組織(圖4)的細胞間質(zhì)中。圖3AQP2在正常膀胱組織中的表達圖4AQP2在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(400×)(400×)7新疆醫(yī)科大學醫(yī)學碩士學位論文AQP3陽性反應呈棕黃色,均表達于膀胱尿路上皮癌及正常膀胱組織粘膜上皮細胞的胞質(zhì)及胞膜。兩者表達位置未見明顯差別。對照組:AQP3主要表達在正常組織粘膜上皮細胞的胞質(zhì)及胞膜,陰性對照未見著色(圖5)。膀胱尿路上皮癌組:AQP3主要定位于膀胱尿路上皮癌組織粘膜上皮細胞的胞質(zhì)及胞膜(圖6)。對原始數(shù)據(jù)輸入SPSS17.0軟件數(shù)據(jù)庫中行方差齊性檢查,確定方差齊后用兩獨立樣本均數(shù)比較t檢

4、驗分析:AQP1在膀胱尿路上皮癌組織中表達量較正常膀胱組織明顯增多,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。AQP2膀胱尿路上皮癌組織及正常膀胱組織中表達強度基本相同,二者之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。AQP3在膀胱尿路上皮癌組織中表達量較正常膀胱組織明顯增多,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(表2)。圖5AQP3在正常膀胱組織中的表達圖6AQP3在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(400×)(400×)表2免疫組織化學法兩組患者AQP1-3表達量的差別(n=25,x±s)分組AQP1AQP2AQP3膀胱尿路上皮癌組3.9167±1.74252.7917±1.10253.2400±1.

5、2342對照組2.5833±1.38052.5000±1.35132.3200±1.4922P<0.01>0.05<0.052免疫印跡法膀胱尿路上皮癌組織中及正常膀胱組織中均有?-actin蛋白表達,蛋白條帶位置為42kD,表達量基本相同。AQP1、AQP2和AQP3在膀胱尿路上皮癌組織中及正常膀胱組織中均有表達。經(jīng)免疫印記發(fā)發(fā)現(xiàn):AQP1蛋白條帶位置為28kD,AQP2蛋白條帶位置為30kD,AQP3蛋白條帶位置為29kD(圖7)。蛋白條帶灰度值分析后,對原始數(shù)據(jù)行方差齊性檢查,確定方差齊后采用兩獨立樣本均數(shù)比較t檢驗分析表明:AQP1在膀胱尿路上皮癌中的表達量較正常膀胱組織中增

6、多,二者之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。AQP2表達量在膀胱尿路上皮癌8新疆醫(yī)科大學醫(yī)學碩士學位論文組織中及正常膀胱組織中并無明顯差別,二者之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。AQP3在膀胱尿路上皮癌中的表達量較正常膀胱組織中增多,二者之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(表3)NCNCNCAQP1(28KD)AQP2(30KD)AQP3(29KD)?-actin(43KD)圖7N為正常膀胱組織C為膀胱尿路上皮癌組織表3免疫印跡法學法兩組患者AQP1-3表達量的差別(n=25,?x±s)分組AQP1AQP2AQP3膀胱尿路上皮癌組2.3826±0.85072.5305±1

7、.04372.2763±0.3668對照組1.6233±0.42932.2405±1.29061.3444±0.8460P<0.05>0.05<0.059新疆醫(yī)科大學醫(yī)學碩士學位論文討論膀胱癌是泌尿外科臨床上最為常見的腫瘤之一,膀胱癌的發(fā)生和發(fā)展都是復雜的、多因素的病變變化過程,既有內(nèi)在的遺傳因素,又有外在的環(huán)境等危險因素。主要危險因素包括:性別、年齡(年齡越大,危險系數(shù)越高)、種族、在尿液中發(fā)現(xiàn)致癌物質(zhì)、膀胱粘膜的慢性炎癥、吸煙、職業(yè)暴露和藥物(非那西丁和環(huán)磷酰胺)

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