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《pokemon蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表達及其意義.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、Pokemon蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表達及其意義［摘要］目的檢測膀胱尿路上皮癌組織中Pokemon蛋白的表達，分析其與臨床病理特征間的關(guān)系。方法收集2010年3月?2013年8月寧波大學(xué)附屬醫(yī)院泌尿外科27例膀胱尿路上皮癌術(shù)屮切除的癌、癌旁及臨近止常組織，應(yīng)用免疫印跡法(Westernblot)檢測標本中Pokemon蛋白的表達，并對其與膀胱癌的臨床病理特征進行分析。結(jié)果Westernblot檢測到Pokemon蛋口在膀胱尿路上皮癌組織中表達較高、在癌旁及正常組織中表達較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(卩〈0.05)o膀胱癌組織中卩okemon蛋白表達與腫瘤病理分級有關(guān)，而與患者的性別、年齡、
2、吸煙史及T7M臨床分期無明顯相關(guān)。結(jié)論Pokemon蛋白表達和膀胱尿路上皮癌的發(fā)病及惡性程度有關(guān)，可能成為膀胱尿路上皮癌治療的有效靶點。［關(guān)鍵詞］卩okemon蛋白；膀胱尿路上皮癌；免疫印跡［中圖分類號］R737.11［文獻標識碼］A［文章編號］1673-7210(2014)07(a)-0056-03原癌基因Pokemon是轉(zhuǎn)錄抑制因子P0K家族的成員，它的主要作用是阻遏關(guān)鍵的抑癌基因ARF,使致癌基因發(fā)揮作用?，F(xiàn)有研究證實Pokemon在淋巴瘤、肝癌、肺癌等不同組織器官的惡性腫瘤中異常表達，但在膀胱癌屮的表達狀態(tài)尚未明確。本研究通過檢測Pokemon蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表達情況，
3、探討Pokemon與膀胱尿路上皮癌發(fā)病機制及臨床病理特征之間的關(guān)系。1資料與方法1.1一般資料收集寧波大學(xué)附屬醫(yī)院泌尿外科2010年3月?2013年8月行膀胱腫瘤手術(shù)，且經(jīng)術(shù)后HE染色病理診斷明確為膀胱尿路上皮癌，排除外伴發(fā)其他臟器原發(fā)惡性腫瘤，共27例，取術(shù)中切除的癌、癌旁及臨近正常組織。27例患者中男22例，女5例；年齡41-81歲，中位年齡67歲；有吸煙史19例，無吸煙史8例；T1+T2期15例，T3+T4期12例；區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移6例，未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例；高分級癌23例，低分級癌4例。1.2主要試劑與儀器RIPA裂解液（碧云天公司），PVDF膜（0.45Mm,Pall公司），
4、BCA蛋白定量試劑盒（Thermo公司），Pokemon抗體（兔多克隆，Abeam公司）,B-actin抗體（鼠單克隆,sigma公司），HRP標記驢抗鼠（Jackson公司）,HRP標記羊抗兔（妙通生物科技有限公司），ECL發(fā)光試劑盒（天根生化科技有限公司）。蛋白定量酶標儀（Riotek公司），蛋白轉(zhuǎn)移電泳儀DYY-7B型（北京市六一儀器廠）。1.3Westernblot檢測參考文獻［1］的方法，切取-80°C低溫保存的組織，提取蛋白并定量后在5%濃縮膠和8%分離膠屮行電泳、轉(zhuǎn)膜，封閉后按步驟結(jié)合一抗、二抗。洗膜后顯影曝光。用軟件QuantityOne分析條帶灰度值，計算卩okemo
5、n蛋白表達的強度。1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用統(tǒng)計軟件SPSS11.0對數(shù)據(jù)進行分析，正態(tài)分布計量資料以均數(shù)土標準差(x±s)表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。計數(shù)資料以率表示，采用x2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1Pokemon蛋白在膀胱癌、癌旁及正常組織中的表達差異Westernblot結(jié)果如圖1所示，QuantityOne軟件分析并求得灰度比后，結(jié)果顯示：Pokemon蛋白在膀胱癌組織、癌旁組織和正常組織中表達分別為(0.715土0.135)、(0.449±0.157)、(0.418±0.163),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)o2.2Pok
6、emon蛋白與膀胱尿路上皮癌各臨床及病理特征間的關(guān)系Pokemon蛋白表達與患者性別、年齡、吸煙史及腫瘤的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)，而與膀胱尿路上皮癌的病理分級有關(guān)。見表1。3討論原癌基因Pokemon(又名ZBTB7A、FBI-1、OCZF、LRF)是卩0K家族的一員。其編碼產(chǎn)物是轉(zhuǎn)錄抑制因子，在人類胚胎形成、細胞增殖、分化、抗凋亡中起重要作用［2］。它也是第一個被發(fā)現(xiàn)的ARE特異性轉(zhuǎn)錄抑制因子，它可通過干擾Rb基因的轉(zhuǎn)錄發(fā)揮致癌作用。有研究發(fā)現(xiàn)Pokemon主要通過ARF-Hdm2-p53-p21信號通路抑制抑癌基因的表達，也可直接抑制P53的活性，促進細胞增殖，因此認為卩oke
7、mon腫瘤發(fā)生過程中的關(guān)鍵始動基因［3］。2005年，Meada等［4］利用組織芯片技術(shù)在腫瘤中首次檢測Pokemon的表達，發(fā)現(xiàn)Pokemon在乳腺癌、肺癌、前列腺癌等人類常見腫瘤中存在過表達。Choi等［3］的研究發(fā)現(xiàn)Pokemon異常高表達見于多種實體腫瘤，鱗癌和腺癌是最常見的細胞類型。劉麗英等［5］、高志遠等［6］、趙心愷等［7］的研究也得出了類似的結(jié)論。本研究使用Westernblot方法檢測Pokemon在膀胱尿路上皮癌、癌旁及正常
