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1、－？ＭＺ分類號§１２４７３學(xué)ＵＤＣ密級棘媛叫義聲ＩＪＹＡＮＧＺＨＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ碩壬學(xué)侄冷文專業(yè)型）（Ｌｕｍｉｎｅｘ液相；Ｓ片同時檢測小鼠３種病毒方法的建立劉春梅．薛眷風(fēng)教受２２５００９指導(dǎo)教師姓名，揚(yáng)州大學(xué)，江蘇揚(yáng)州，心＇上海２０１２０３高誡教授，，，上海實(shí)驗(yàn)動物巧究中申請學(xué)位級別：碩壬學(xué)科專業(yè)名稱：獸醫(yī)碩壬２０１５４：２０１５年６月論文提交日期：年月論文答辯日期揚(yáng)州大學(xué)學(xué)位授予日期１５年６月：２０學(xué)位
2、授予單位：？答辯委員會主席：徐秀龍教授２０１５年６月＊學(xué)佐｛＾文Ｌｕｍｉｎｅｘ液相巧片同時檢測小鼠３種病毒方法的建立Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆａｍｕｌｔｉｌｅｘｓｕｓｅｎｓｉｏｎａｒｒａｐｐｙｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅｋｉｎｄｓｏｆｍｉｃｅｖｉｒｕｓ研究生：劉春梅導(dǎo)師；薛整風(fēng)教授高誠教授劉春梅；Ｌｕｍｉｎｅｘ液相總片同時檢測小鼠３種病毒方法的建立ＩＬｕｍｉｎｅｘ液相巧片同時檢測
3、小鼠３種病毒方法的建立中文摘要仙臺病毒（ＳｅｎｄａｉｖｉｍｓＳｅＶ）屬副黏病毒科，副黏病毒屬，為單股負(fù)鏈ＲＮＡ病毒。，一ｅｃｃａｏｅｎｅｅＳｅＶ唯的自然宿主是咕齒類動物，ＳｅＶ為清潔級和ＳＰＦ（ＳｐｉｆｉｔｈｆｒＳＰＦ）級ｐｇ，實(shí)驗(yàn)小鼠的必須檢測項(xiàng)目。小鼠巧炎病毒（Ｍｏｕｓｅｈｅｐａｔｉｔｉｓｖｉｍｓ，ＭＨＶ）是冠狀病毒科，冠狀病毒屬的正鏈ＲＮＡ病毒，基因組不分節(jié)段。ＭＨＶ是清潔級小鼠必檢項(xiàng)目。呼腸孤病毒３ｅｏｖ－型（Ｒｉｒａｓｔｙｐｅ３，Ｒｅｏ３）屬于
4、呼腸孤病毒科，正呼腸孤病毒屬，是雙股ＲＮＡ病毒。一ｅｏ－ＰＦ級Ｒ３為Ｓ實(shí)驗(yàn)小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠的必檢項(xiàng)目。實(shí)驗(yàn)動物旦上述感染病毒，。將干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果，影響科學(xué)研究的準(zhǔn)確性目前，實(shí)驗(yàn)室診斷主要運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ＥＬ投Ａ）等血清學(xué)方法，也可通過?。崳姡痉蛛x方法檢測。ＥＵＳＡ測抗體是檢測病毒最常用的方法，但抗體在感染１２周后才能出現(xiàn)，因此ＥＬＩＳＡ不適合感染早期的診斷。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）和ＲＴ－ＰＣＲ是重要的分子生物
5、學(xué)檢測方法、，具有簡便快速的特點(diǎn)，己廣泛應(yīng)用于病毒學(xué)細(xì)菌學(xué)、寄生蟲學(xué)檢測中。Ｌｕｍｉｎｅｘ液相芯片技術(shù)是２０世紀(jì)９０年代興起的新型檢測技術(shù)，它集合了激光技術(shù)、流式細(xì)胞技術(shù)Ｗ及微球數(shù)字信號處理技術(shù)。與傳統(tǒng)的臨床檢測方法相比，其主要優(yōu)點(diǎn)在于高通量、高敏感、重復(fù)性高、檢測范圍廣、反應(yīng)速度快，僅需微量樣品即可進(jìn)行檢測等。？？？Ｌｕｍ－抗ｉｎｅｘ具有兩大核也技術(shù)：ｘＭＡＰ技術(shù)和ｘＴＡＧ技術(shù)。ｘＭＡＰ技術(shù)檢測原理為抗原？體反應(yīng)，，可用于蛋白質(zhì)和核酸的檢測；ｘＴＡＧ技術(shù)能夠測定若干基因
6、組形式如基因表達(dá)分析（ｓｉｎｌｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｏｌｍｏｒｈｉｓｍＳＮＰ）分析定，微ＲＮＡ分析，單核昔酸多態(tài)性ｙ，特ｇｐｐ，序列的檢測等。一立ｅｅｏ－目的種能快速檢測小鼠ＳＶ、ＭＨＶ、Ｒ３３種。：：為建等病毒的方法方法－－ＰＣＲ技術(shù)和Ｌｕｍ聯(lián)合使用ＲＴｉｎｅｘ液相基因巧片技術(shù)，針對ＳｅＶ、ＭＨＶ、Ｒｅｏ３的保守、１區(qū)域分別設(shè)計(jì)引物，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)増獲得大小為２６３ｂｐ５２ｂｐ和化Ｏｂｐ的目的一ａｎｔ－片段；對引物進(jìn)行修飾，上游引物分別連接段特定的ＴＡＧ序列
7、（與微球上的ｉＴＡＧ－ＰＣ民反應(yīng)反向互補(bǔ)），下游引物用生物素標(biāo)記。利用修飾過的引物重新進(jìn)行ＲＴ，產(chǎn)物與微揚(yáng)州大學(xué)碩壬學(xué)位論文口球進(jìn)斤雜交，建立小鼠３種病毒的液相基因忘片方法；并評價(jià)該方法的特異性、靈敏度。分別利用Ｌｕｍｉｎｅｘ液相基因忘片和ＥＬＩＳＡ對送檢小鼠進(jìn)行檢測，對比兩種方法的檢出率。－、結(jié)果：建立的液相基因蒼片檢測方法能快速檢測小鼠ＳｅＶＭＨＶ、Ｒｅｏ３等３種病毒，且該方法方便快速、特異性好、靈敏度高，病毒檢出率優(yōu)于ＥＬＩＳＡ。結(jié)論；成功建立了?。崳娛螅撤N病
8、毒的液相忘片檢測方法。關(guān)鍵詞；Ｌｕｍｉｎｅｘ；液相芯片；檢測；仙臺病毒；小鼠肝炎病毒；呼腸孤病毒３型劉春梅＝Ｌｕｍｉｎｅｘ液相衣片同時檢測小鼠３種病毒方法的建立口ＩＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆａｍｕｌｔｉｐｌｅｘｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎａｒｒａｙｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅｋｉｎｄｓｏｆｍｉｃｅｖｉｒｕｓＡｂｓｔｒａｃｔ－－ＳｅｎｄａｉｖｉｒｕｓＳｅＶ）ｉｓａｓｉｎｌｅｓｔｒａｎｄｅｄｎｅａｔｉ
