microrna-133誘導(dǎo)綿羊間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成肌細(xì)胞的研究

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1、ＢＢＷＫ＇＇．學(xué)校代碼：１０２２５學(xué)號(hào)Ｉ５４４５；Ｓ＇；？■．＇＊－＞？＼學(xué)化冷文Ｍ－Ｂ３誘導(dǎo)綿羊間充叛干細(xì)胞分化為ｉｃｒｏＲＮＡ成肌細(xì)胞的研究宋維文指導(dǎo)教師姓名；安鐵沫教授東北林業(yè)大學(xué)：申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩±學(xué)科專(zhuān)業(yè)發(fā)育生物學(xué)論文提交日期２０１５年４月論文答辯日期：２０１５年６月：授予學(xué)位單位；：東北林業(yè)大學(xué)授予學(xué)位日期答辯委員會(huì)主席：論文評(píng)閱人；、＃４義如乂學(xué)學(xué)校代碼；１０２２５Ｓ１５４４學(xué)號(hào)：５學(xué)化冷文Ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ１３３誘導(dǎo)綿羊間充質(zhì)干細(xì)胞分化為

2、成肌細(xì)胞的研究宋維文指導(dǎo)教師姓名；安鐵誅教授東北林業(yè)大學(xué)；申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別；碩擊學(xué)科專(zhuān)業(yè)發(fā)育生物學(xué)０１５４２０１５年６月論文提交日期；２年月論文答辯日期：業(yè)大學(xué)授予學(xué)位曰期：授予學(xué)位單位：東北林答辯委員會(huì)主席；論文評(píng)閱人：東Ａ媒４欠會(huì)ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣｏｄｅ；１０２２５ＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄｅ：ＳＩ５４４５ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒＴｈｅＳｔｕｄｏｆ－ｙｍｉｃｒｏＲ１３３ｉｎｄｕｃｅｄｓｈｅ巧ｍｅ化ｎｃｈｙｍａｌｓｔ

3、ｅｍｃｅｌｌｓ出ｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｉｎｔｏＭｙｏｂｌａｓｔｓＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＳｏｎｗｅｉｗｅｎｇＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ；Ｐｒｏｆ．ＡｎＴｉｅｚｈｕＡｓｓｏｃｍｋＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ａ．Ｐｒｏｆ．ＷａｎｇＣｈｕｎｓｈｅｎｇＡｃａｄｅｍｉｃＤ巧ｒｅｅＡｐｐＫｅｄ化ｒ：ＭａｓｔｅｒＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＤｅｖｅｌｏｍｅｎｌｐｔａＢｉｏｌｏｇｙＤａｔ；ｅｏｆＯｒａｌＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎ：Ｊｕｎｅ，２０１５Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒＵｎｉ

4、ｖｅｒｓｉｔｙｙ摘要已有研究證實(shí)－１３３，ｍｉ民在肌肉發(fā)育中起到非常重要的作用。間充質(zhì)干細(xì)胞是具有－自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞１３３。為了探明利用ｍｉＲ誘導(dǎo)綿羊化帶和骨髓間充質(zhì)干－細(xì)胞為成肌細(xì)胞的方法，本研究采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將肌肉恃異表達(dá)的ｍ１３３ｉ艮轉(zhuǎn)染到綿羊脫帶，：、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后檢測(cè)其誘導(dǎo)為成肌細(xì)胞的能力。其研究結(jié)果如下１．綿羊擠帶、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染－ｍ－１－１３３ｍ采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將ｉＲ３３ａ２表達(dá)載體或ｍｉＲｍｉｃｓ分ｉ別轉(zhuǎn)染綿羊廝帶間充質(zhì)和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；２．轉(zhuǎn)染細(xì)胞

5、培養(yǎng)與形態(tài)觀察將上述轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)的第２８ｄ，在倒置巧光顯微鏡下細(xì)胞呈現(xiàn)梭形或紡鏈形當(dāng)細(xì)胞約達(dá)到８０％匯合時(shí)，細(xì)胞由禍旋狀生長(zhǎng)變成定向有序的排列生長(zhǎng)并且；，鄰近細(xì)胞間出現(xiàn)融合傾向；３．轉(zhuǎn)染細(xì)胞的鑒定１ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)采用ＲＴ－ＰＣＲ方法檢測(cè)上述細(xì)胞（）成肌細(xì)胞特異表達(dá)基因的ｑｑ骨骼肌特異基因ＭｙｏＤ、ＭｙｏＧ、Ｄｅｓｍｉｎ、Ｔｎｎ口、Ｍｙｆ５表法情況。在轉(zhuǎn)染前未檢測(cè)到ＭｙｏＤ和ＭｙｏＧ表達(dá)，轉(zhuǎn)染后可Ｗ檢測(cè)到ＭｙｏＤ和ＭｙｏＧ的表達(dá)；Ｄｅｓｍｉｎ、Ｔｎｎｉ２、Ｍｙ巧在轉(zhuǎn)染后相對(duì)表達(dá)量增加。此外，與綿羊骨髓

6、間充質(zhì)干細(xì)胞相比，綿羊脫帶間充質(zhì)干細(xì)胞在誘導(dǎo)后Ｄｅｓｍｉｎ、Ｔｎｎ口、Ｍｙｆ５相對(duì)表達(dá)量增加更多；２ＭＤ、Ｄ－（）成肌細(xì)胞特異表達(dá)基因的免疫炎光檢測(cè)利用ｙｏｅｓｍｉｎ和ａａｃｔｉｎ相應(yīng)抗體對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行免疫巧光檢測(cè)，其結(jié)果，與對(duì)照組（未轉(zhuǎn)染細(xì)胞）在鏡下未檢測(cè)到相應(yīng)基因發(fā)出巧光相比，４組轉(zhuǎn)染細(xì)胞中，ＭｙｏＤ和Ｄｅｓｍｉｎ蛋白檢測(cè)結(jié)果均呈現(xiàn)陽(yáng)性，而ａ－ａｃｎ呈ｔｉ現(xiàn)陰性；－ｍ－（３）成肌細(xì)胞特異表達(dá)基因的流式細(xì)胞檢測(cè)當(dāng)將ｐｃＤＮＡ３．１ｉＲ１３３ａ２表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)染綿羊膠帶和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后，采用流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測(cè)成

7、肌細(xì)胞特異蛋Ｄ、Ｄ－白Ｍｙｏｅｓｍｉｎ和ａａｃｔｉｎ，其結(jié)果，在綿羊麻帶、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中，表達(dá)ＭｙｏＤ－的細(xì)胞量分別為１２，ｅｓｍｎ的細(xì)．．５．２％和２９．６％表達(dá)Ｄｉ９９３％和９９％ａ胞量分別為，表達(dá)－ａｃｔｉｎ０．９．的細(xì)胞量分別為１７％和９２４％當(dāng)將ｍｉＲ１３３ｍｉｍｉｃｓ分別轉(zhuǎn)染綿羊廝帶和骨髓；間充質(zhì)干細(xì)胞后，在送些細(xì)胞中檢測(cè)到表達(dá)ＭｙｏＤ的細(xì)胞量分別為９９．３％和４３．７％，表－ｅｓｍｉｎ的細(xì)胞量分別為９９．０％和１００％ａａｃｔｉｎ．達(dá)Ｄ，表達(dá)的細(xì)胞量分別為１０７％和１．６８％；上述結(jié)果表明ｍｉ民－，

8、利用１３３成功誘導(dǎo)綿羊擠帶間充質(zhì)干細(xì)胞和綿羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為成肌細(xì)胞一，本研究結(jié)果為進(jìn)步探討誘導(dǎo)間充質(zhì)細(xì)胞為成肌細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞分化機(jī)制提供