notch信號(hào)通路相關(guān)基因在牛卵泡發(fā)育中表達(dá)情況的初步研究

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1、分類號(hào)：Q7單位代碼：10193密級(jí)：公開學(xué)號(hào)：2012198碩士學(xué)位論文Notch信號(hào)通路相關(guān)基因在牛卵泡發(fā)育中表達(dá)情況的初步研究ApreliminarystudyofNotchsignalingpathwaygenesexpressioninbovineovarianfollicledevelopment作者姓名：劉洋學(xué)位類別：理學(xué)碩士專業(yè)名稱：生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向：免疫化學(xué)指導(dǎo)教師：張林波教授田見暉教授所在學(xué)院：生命科學(xué)學(xué)院2015年5月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成

2、果。盡我所知，除文中特別加以標(biāo)注和致謝所列內(nèi)容外，論文中不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。本學(xué)位論文所有內(nèi)容若有不實(shí)之處，本人愿意承擔(dān)一切相關(guān)法律責(zé)任和后果。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：年月日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明1、本人完全了解吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：研究生在校攻讀學(xué)位期間所完成的論文及相關(guān)成果的知識(shí)產(chǎn)權(quán)屬吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)所有，并同意將本論文的版權(quán)授

3、權(quán)給吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。2、本人（同意/不同意，務(wù)必打印后填寫）吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)將本論文版權(quán)授權(quán)給不同媒體進(jìn)行電子出版、多媒體出版、網(wǎng)絡(luò)出版以及其他形式出版（涉密學(xué)位論文解密后應(yīng)遵守此協(xié)議）。3、本人聲明畢業(yè)后若發(fā)表在攻讀研究生學(xué)位期間完成的論文及相關(guān)的學(xué)術(shù)成果，必須以吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)作為第一署名單位。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：年月日指導(dǎo)教師簽名：簽字日期：年月日摘要目的：Notch信號(hào)通路是一條在進(jìn)化上十分保守的信號(hào)通路，Notch

4、信號(hào)能夠傳導(dǎo)相鄰細(xì)胞間的細(xì)胞信號(hào)，從而影響細(xì)胞的增殖、分化及凋亡。然而Notch信號(hào)通路對(duì)哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育的調(diào)控研究主要集中在對(duì)原始卵泡的形成及募集。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑檠芯縉otch信號(hào)通路相關(guān)基因在卵泡優(yōu)勢化中的表達(dá)變化。以探究在牛卵泡優(yōu)勢化過程中具體哪些Notch信號(hào)基因表達(dá)會(huì)有相應(yīng)的影響。為進(jìn)一步研究Notch信號(hào)通路調(diào)控卵泡發(fā)育提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：本實(shí)驗(yàn)取牛優(yōu)勢卵泡和生長卵泡的壁層顆粒細(xì)胞/卵丘顆粒細(xì)胞，應(yīng)用PT-PCR篩選、實(shí)時(shí)定量PCR檢測Notch信號(hào)通路相關(guān)基因Notch2、Jagged1、RBP/Jκ、hes1和c

5、-myc的表達(dá)變化。在體外條件下培養(yǎng)生長卵泡的顆粒細(xì)胞并通過免疫熒光、細(xì)胞轉(zhuǎn)染、MTT法觀察Notch信號(hào)通路與顆粒細(xì)胞增殖之間的關(guān)系。隨后通過篩選牛優(yōu)勢卵泡Marker分子，作為顆粒細(xì)胞優(yōu)勢化的標(biāo)志，觀察刺激/抑制Notch信號(hào)通路后其Marker分子的變化情況。結(jié)果：篩選出在牛顆粒細(xì)胞中表達(dá)的Notch家族成員，包括：Notch2、Jagged1、RBP/Jκ、hes1和c-myc。卵泡優(yōu)勢化后壁層顆粒細(xì)胞中的Notch2可能表達(dá)下調(diào)，并會(huì)影響其靶基因hes1和c-myc的下調(diào)。DAPT（Notch信號(hào)通路抑制劑）會(huì)抑制顆粒細(xì)胞

6、的增殖，過表達(dá)N2ICD會(huì)促進(jìn)顆粒細(xì)胞的增殖。且卵泡優(yōu)勢化以后顆粒細(xì)胞增值速率減緩。成功構(gòu)建了真核重組質(zhì)粒CD513B1-c-myc。并通過體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Notch信號(hào)通路可能通過促進(jìn)靶基因c-myc的表達(dá)進(jìn)而促使細(xì)胞增殖。而刺激/抑制Notch信號(hào)通路后都不能夠使牛優(yōu)勢卵泡Marker分子上調(diào)。結(jié)論：Notch信號(hào)通路與顆粒細(xì)胞增殖呈正向相關(guān)，同時(shí)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Notch信號(hào)通路可能通過促進(jìn)靶基因c-myc的表達(dá)進(jìn)而促使細(xì)胞增殖。但牛卵泡優(yōu)勢化以后其顆粒細(xì)胞增殖速率放緩且刺激或抑制Notch信號(hào)通路后都不能夠使牛優(yōu)勢卵泡Marker分

7、子上調(diào)。關(guān)鍵詞：Notch信號(hào)通路，牛優(yōu)勢卵泡，顆粒細(xì)胞，基因表達(dá)IAbstractObjective:Notchsignalingpathwayisahighlyconservedsignalingpathwayinevolution,whichcanbeconductedsignalingmoleculesinbetweencells.SoNotchsignalingpathwaycaninfluencecellproliferation,differentiationandapoptosis.However,nowadaysp

8、eoplearemainlyfocusedontheregulationofNotchsignalingpathwayinmammalianfolliculardevelopmentoftheformationandrecruitme