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《基于est-ssr分子標記的中國石榴遺傳多樣性研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、摘要石榴為石榴科石榴屬落葉果樹，在食用、藥用和綠化觀賞方面具備較高的利用價值。通過構(gòu)建石榴cDNA文庫，開發(fā)EST-SSR引物，分析38個石榴品種的遺傳多樣性，繪制聚類圖，為中國石榴品種鑒定、雜交育種以及分子標記輔助育種等領(lǐng)域提供參考。本試驗結(jié)果如下：1、以軟籽石榴品種“紅瑪瑙籽”成熟果實籽粒為材料，構(gòu)建石榴cDNA文庫，從石榴cDNA文庫中隨機挑選若干個克隆進行測序，獲得1596條石榴EST序列，處理后共得到907個Unigenes序列，利用SSRIT軟件在特定條件下搜索獲得179個2到4核苷酸重復類型SSR，占所有Unigenes序列的19.7%，主要重復序列為二、三核苷酸重復，占全部
2、SSR的95.5%。在所有二核苷酸重復序列中，(GA)n出現(xiàn)數(shù)量最多，出現(xiàn)頻率為24.0%，TG以21.2%的比例緊隨其次；所有三核苷酸重復序列中，(AGA)n、(AAG)n、(GAG)n出現(xiàn)的數(shù)量較為接近，分別以10.4%、9.0%、9.0%的比例占據(jù)前三位。2、通過Primer、DNAman等軟件進行引物設(shè)計，在設(shè)定條件下共設(shè)計20對引物，并通過白玉石籽、泰山紅、皮山2號這3個不同產(chǎn)地的石榴品種進行篩選，篩選得到10對得到預期片段的引物。3、使用聚丙烯酰胺凝膠電泳試驗檢測38個石榴品種，篩選得到8對引物，具有較高的多態(tài)性。利用這些引物對38個石榴品種進行多態(tài)性分析，平均檢測出2.60個
3、條帶；觀測雜合度的范圍為0.125~0.833，（平均0.367）；多態(tài)信息含量值的范圍為0.080~0.664（平均0.377）。4、對這些新開發(fā)的標記進行遺傳相似性和聚類分析，38個石榴品種的遺傳相似性系數(shù)為0.68~0.97，平均為0.83，這說明供試石榴品種間遺傳相似性較高。由聚類圖可知，在相似性系數(shù)0.68處，38個石榴品種可劃分為兩大組，分別是以安徽品種為主的組I和以山東品種為主的組II，說明兩地的石榴品種具有不同的遺傳背景；組I在相似性系數(shù)為0.80條件下又分為3個亞組（I-A、I-B、I-C），其中亞組I-B全部為安徽淮北品種，說明安徽淮北的石榴具有較為獨特的遺傳背景。關(guān)鍵
4、詞：中國石榴，EST-SSR標記，遺傳多樣性，聚類分析IAbstractPomegranate(PunicagranatumL.)isahighedible,medicinalandornamentalvaluefruittreewhichbelongstoPunicaceae，PunicaL.ThroughtheconstructionofcDNALibraryofpomegranateanddevelopmentofEST-SSRprimers,38pomegranateaccessionscollectedwereanalyzed.Theseresearchproviderefere
5、nceinidentificationofvarieties,HybridizationbreedingandMolecularmarkassistedbreedingforChinesepomegranate.Thefollowingistheresult:1.Usingthematureseedofsoft-seedpomegranatecultivarHongmanaoziasmateral,pomegranatecDNAlibrarieswereconstructed.Thenasetofcloneswererandomlyselectedandsingle-passsequenc
6、edfromtheir5′end.Asaresult,1596validsequencesweregenerated,inwhich907unigeneswereobtainedafterinitialassemblywithClustalxprogram,179bitypetotetra-typeSSRs(19.7%)wereobtainedfromtheseunigenes.OftheEST-SSRs,dinucleotideandtrinucleotidehaveaabosolutemajority,themostcommontworepeatmotifswereGA(24.0%)a
7、ndTG（21.2%）indinucleotide,andthemostcommonthreerepeatmotifsintrinucleotideareclosed:AGA(10.4%),AAG(9.0%),GAG(9.0%).2.TwentyprimerpairsweredesignbyPrimer5.0undertheconditionsofsetting.And10primerpairswereasthesame
