擬穴青蟹（Scylla paramamosain）肌漿蛋白過(guò)敏原的致敏性研究

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1、學(xué)校編碼10390分類號(hào)S986學(xué)號(hào)201514908005密級(jí)博士學(xué)位論文擬穴青蟹（Scyllaparamamosain）肌漿蛋白過(guò)敏原的致敏性研究指導(dǎo)教師：蘇文金教授劉光明教授作者姓名：楊陽(yáng)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士學(xué)科專業(yè)：水產(chǎn)研究方向：水產(chǎn)品加工論文提交日期：2018年05月03日論文答辯日期：2018年06月02日學(xué)位授予單位：集美大學(xué)學(xué)位授予日期：2018年06月答辯委員會(huì)主席：陳清西教授博士學(xué)位論文擬穴青蟹（Scyllaparamamosain）肌漿蛋白過(guò)敏原的致敏性研究ResearchontheAllergenicityofMy

2、osinogenAllergensfromMudCrab(Scyllaparamamosain)學(xué)科門類：農(nóng)學(xué)作者姓名：楊陽(yáng)指導(dǎo)教師：蘇文金教授劉光明教授學(xué)科專業(yè)：水產(chǎn)研究方向：水產(chǎn)品加工學(xué)位授予單位：集美大學(xué)論文答辯日期：2018年06月02日學(xué)術(shù)誠(chéng)信聲明茲呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。本人依法享有和承擔(dān)由此論文產(chǎn)生的權(quán)利和責(zé)任。聲明人(簽名)：時(shí)間：保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)聲明本人完全了解集美大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文

3、的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意集美大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。作者（簽名）：導(dǎo)師（簽名）：時(shí)間：擬穴青蟹（Scyllaparamamosain）肌漿蛋白過(guò)敏原的致敏性研究摘要食物過(guò)敏作為食品安全的熱點(diǎn)問(wèn)題在全球引起了廣泛關(guān)注，甲殼類水產(chǎn)品是聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織公布的八大類過(guò)敏食物之一。擬穴青蟹（Scyllaparamamosain）是我國(guó)重要的水產(chǎn)資源，但其產(chǎn)量和消費(fèi)量的增加，也伴隨著越來(lái)越多的食物過(guò)敏問(wèn)題。

4、對(duì)擬穴青蟹引起的食物過(guò)敏反應(yīng)流行病學(xué)調(diào)查和擬穴青蟹過(guò)敏原結(jié)構(gòu)、表位及其致敏性的系統(tǒng)分析是開發(fā)低致敏食品和甲殼類水產(chǎn)食物過(guò)敏性疾病控制的基礎(chǔ)。本研究于2010年至2017年對(duì)集美大學(xué)在校生發(fā)放食物過(guò)敏流行病學(xué)調(diào)查問(wèn)卷共17324份，對(duì)收回的13361份有效問(wèn)卷統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，蟹類是該群體中主要的過(guò)敏食物，進(jìn)一步對(duì)調(diào)查對(duì)象中14164名學(xué)生的血清學(xué)分析表明蟹類過(guò)敏比例為4.31%，而擬穴青蟹的肌漿蛋白能夠被65.14%的蟹類過(guò)敏患者血清中的特異性免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）E識(shí)別。精氨酸激酶（argininekinase，

5、AK）是擬穴青蟹肌漿蛋白中的主要過(guò)敏原，本文首先通過(guò)X射線衍射獲得了分辨率為3.0?的AK晶體結(jié)構(gòu)，基于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的對(duì)比分析結(jié)果表明，節(jié)肢動(dòng)物中的AK具有保守的一級(jí)結(jié)構(gòu)、二級(jí)結(jié)構(gòu)和高級(jí)結(jié)構(gòu)?；诳乖砦坏膶?duì)比分析結(jié)果表明，不同物種中AK線性表位區(qū)域呈現(xiàn)高度的一致性，主要分布于氨基酸序列（aminoacid，AA）25?44、AA130?155和AA308?321；而構(gòu)象表位則主要分布于AK高級(jí)結(jié)構(gòu)保守區(qū)。此外，本研究完成了對(duì)擬穴青蟹肌漿蛋白中新型過(guò)敏原磷酸丙糖異構(gòu)酶（triosephosphateisomerase，TIM）和肌質(zhì)鈣結(jié)合

6、蛋白（sarcoplasmiccalcium-bindingprotein，SCP）的分離純化，并首次發(fā)現(xiàn)細(xì)絲蛋白C（filaminC，F(xiàn)LNc）是存在于擬穴青蟹肌漿中的新型過(guò)敏原。對(duì)擬穴青蟹肌漿中四種過(guò)敏原的血清學(xué)分析結(jié)果表明，AK和FLNc能被較多的蟹類過(guò)敏患者血清識(shí)別，而識(shí)別TIM和SCP的患者血清數(shù)量較少。目前這四種過(guò)敏原已被世界衛(wèi)生組織/國(guó)際免疫學(xué)會(huì)聯(lián)盟（worldhealthorganization/internationalunionofimmunologicalsocieties，WHO/IUIS）的過(guò)敏原命名系統(tǒng)收錄，

7、AK、SCP、TIM和FLNc分別被命名為Scyp2、Scyp4、Scyp8、和Scyp9。采用蟹類過(guò)敏患者特異性識(shí)別的過(guò)敏原對(duì)過(guò)敏患者進(jìn)行嗜堿性粒細(xì)胞激活試驗(yàn)（basophilactivationtest，BAT），以進(jìn)一步確定患者的過(guò)敏反應(yīng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)嗜堿性粒細(xì)胞表面抗原CD63和CD203c的表達(dá)上調(diào)與患者自訴的過(guò)敏癥狀嚴(yán)重程度呈現(xiàn)正相關(guān)。以經(jīng)過(guò)BAT驗(yàn)證的過(guò)敏患者血清IgE為靶蛋白，對(duì)噬菌體展示肽庫(kù)進(jìn)行親和淘選，結(jié)合生物信息學(xué)分析鑒定了AK的5個(gè)線性表位區(qū)域和8個(gè)構(gòu)象表位區(qū)域、TIM的4個(gè)線性表位區(qū)域和2個(gè)構(gòu)象表位區(qū)域、FLNc的

8、6個(gè)線性表位區(qū)域和6個(gè)構(gòu)象表位區(qū)域、SCP的6個(gè)構(gòu)象I表位區(qū)域。利用Balb/c小鼠建立的四種肌漿蛋白過(guò)敏原的動(dòng)物模型表明，AK在機(jī)體內(nèi)的致敏性最強(qiáng)，能夠引起B(yǎng)淋巴細(xì)胞的增殖，同時(shí)產(chǎn)生高水平的抗原特異性Ig