鼠傷寒沙門氏菌rfbn基因突變株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性初步研究

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1、分類號Ｓ８５２．４學(xué)號Ｓ２（ｍ巧１０四川巧化大學(xué)碩±學(xué)位論文鼠傷寒沙口巧菌ｒｆＭ基因突變株的構(gòu)建及其生槪學(xué)特性巧步硏究尹云云指導(dǎo)教巧化巧科研巧員學(xué)稱專業(yè)巧防獸醫(yī)學(xué)巧究方向巧祐巧生化與化巧學(xué)二零一左年Ａ月論文獨(dú)鑰性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所?。崳姷玫某晒１M我所知，除了文中特別加Ｗ標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料一。與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論

2、文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：么之年月曰＾關(guān)于論文使用授巧的黃明、：本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可Ｗ采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。□本論文不保密。□本論文保密，在適用本授＿＿年解密后權(quán)。□內(nèi)劃＂＂（請?jiān)冢咨希郑崳娧芯可灻耗辏拊略唬崳姺矫粗墸??；瘜?dǎo)師簽名：ＡＷ《年月／ＪＴ日中文摘要鼠傷寒沙口氏菌聽ｉＶ基因編碼的

3、蛋白為合成０－抗原的鼠李糖轉(zhuǎn)移酶，它負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)贏李糖。我們構(gòu)建了鼠傷寒沙口氏菌所Ｗ基因缺失株Ｗ及阿拉伯糖調(diào)控所Ｗ基因表達(dá)的突變株，并對其進(jìn)行生物學(xué)特性的巧巧研究，主要內(nèi)容可歸納如下：１鼠傷寒沙口氏菌基因缺失株的構(gòu)建鼠傷寒沙口氏菌所Ｗ基因大?。梗矗担猓?，我們構(gòu)建了重組自殺性質(zhì)粒ＹＡ４２８６－Ａ／ＷＶ，利用自殺性質(zhì)粒介導(dǎo)的同源重組方法ｐ，構(gòu)建了所Ｗ基因缺失株。：／ＬＰＳ圖譜顯示，Ａ／：／ＺＷ缺失株沒有完整的ＬＰＳ，其ＬＰＳ結(jié)構(gòu)包括類脂Ａ、核也多一５ａ－Ｗ糖和個半乳糖。我們構(gòu)建了１聽ｉＶ回補(bǔ)質(zhì)粒，將其電轉(zhuǎn)化入Ａ／ｙＺ缺失株，ＬＰＳ圖譜顯示－；Ｚ，１

4、５ａＷ回補(bǔ)質(zhì)粒能夠恢復(fù)ＡｉＶ缺失株的ＬＰＳ結(jié)構(gòu)：／辦，表明成功構(gòu)建訴７Ｖ基因缺失株。２鼠傷寒沙口氏菌阿拉伯糖調(diào)控ｒｙＷＶ基因突變株的構(gòu)建我們通過改造詩Ｗ基因的ＳＤ序列和起始密碼子，構(gòu)建了重組自殺性質(zhì)粒－ＹＡ４２８６－Ｍ利用自殺：ＴＴａｒａＣＰＴｐ４ｐａ婦ＢＡＤ々性質(zhì)粒介導(dǎo)的同源重姐方法，構(gòu)建了兩株阿拉伯糖調(diào)控所Ｗ基因表達(dá)的突變株：Ａ所如：：ＴＴａｒａＣＰＢＡＤ＾ｙＳＭ起始密碼子ＡＴＧ）和Ａ／卿Ｖ／Ｖ雌Ｚ：：ＴＴｆｌｍＣＰＢＡＤ所Ｗ（起始密碼子ＧＴＧ）。在有阿拉伯糖存在條件下，Ａｔ押ＪＶＡＰｆｌ站：：ＴＴａｍＣＰｂａｄ坤Ｗ（起始密碼子ＡＴＧ）

5、突變株，調(diào)控表達(dá)基因，使細(xì)菌能夠合成完整的ＬＰＳ；而沒有阿拉伯糖的條件下，所Ｗ基因不表達(dá)，其ＬＰＳ表型與Ａ／娜ｉＶ株相同。然而，在有阿拉伯糖存在條件下，Ａｒ／＆ｉＶ／ＶｆｌｇＺ：：ＴＴｆｌｒａＣＰＢＡＤｒｙＷＶ（起始密碼子ＧＴＧ）突變株，娜ｉＶ基因少量表達(dá)，細(xì)菌沒有完全恢復(fù)ＬＰＳ結(jié)構(gòu)。３鼠傷寒沙口氏菌突變株生物學(xué)特性硏究為了解析基因?qū)κ髠晨谑暇飳W(xué)特性的影響，我們系統(tǒng)地比較了突變株與野生株在生長曲線、泳動與群集、對多粘菌素Ｂ的抵抗力、粘附與入侵及毒力這幾個方面的差異。結(jié)果表明ＺＷ缺失株與ＴＴ＜Ｃ，Ａ／ｙ社：：３ｒａＰｂａｄｔ＾ＺＷ（

6、起始密碼子ＡＴＧ）突變株在體外生長曲線、細(xì)胞粘附率、細(xì)胞入侵率與野生株無顯著性差異。相比之下，ｉＶ基因缺失后辦，菌株的泳動和群集能力顯著下降（ＰＯ．ＯＯｌ），在多粘菌素Ｂ作用下的存活率顯著下降（ＰｃＯ．ＯＯｌ），毒力Ｉ下降。同時，在阿拉伯糖存在條件下，Ａ所ＷＡｐｆｌ紅：：ＴＴｆｌｒａＣＰＢＡＤ／聽Ｗ（起始密碼子ＡＴＧ）突變株的泳動和群集能力得到提升，而完全恢復(fù)對多粘菌素Ｂ的抵抗力。綜上所述，我們證實(shí)，如?；虻娜笔κ髠晨谑暇捏w外繁殖、粘附與入侵沒有影響，卻能顯著降低細(xì)菌的毒力和對生物活性物質(zhì)的抵抗力。關(guān)鍵詞鼠傷寒沙口氏菌，生物學(xué)特性，

7、所Ｗ，調(diào)控延遲減毒ＩＩＣｏｎｓｔｒｕｅ材ｏｎａｎｄＰｒｅｌｉｍｉｎａｒｙＥｖａｌｕａ材ｏｎｏｆＢｉｏｌｏｉｃａｌｇｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｒｆｂＮＧｅｎｅｍｕｔａｎｔｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａｅｎｔｅｒｉｃａｓｅｒｏｖａｒＴｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍＡＢＳＴＲＣＴ－ｎＲｈａｍｎｏｓｅａｉｍｏｒｔａｎｔｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆＧａｔｉｅ打，ｉｓｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｂ出ａｍｎｏｓｅ，ｐｇｙ化ａｎｓｆｅｒａｓｅｗｈｉｃｈｗａｓ