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《鼠傷寒沙門氏菌rfbn基因突變株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性初步研究》由會員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號S852.4學(xué)號S2(m巧10四川巧化大學(xué)碩±學(xué)位論文鼠傷寒沙口巧菌rfM基因突變株的構(gòu)建及其生槪學(xué)特性巧步硏究尹云云指導(dǎo)教巧化巧科研巧員學(xué)稱專業(yè)巧防獸醫(yī)學(xué)巧究方向巧祐巧生化與化巧學(xué)二零一左年A月論文獨(dú)鑰性聲明本人鄭重聲明:所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所?。崳姷玫某晒1M我所知,除了文中特別加W標(biāo)注和致謝的地方外,學(xué)位論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料一。與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論
2、文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名:么之年月曰^關(guān)于論文使用授巧的黃明、:本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留使用學(xué)位論文的規(guī)定,即學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版,允許論文被查閱和借閱,可W采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。□本論文不保密。□本論文保密,在適用本授__年解密后權(quán)。□內(nèi)劃""(請?jiān)冢咨希郑崳娧芯可灻耗辏拊略唬崳姺矫粗墸??;瘜?dǎo)師簽名:AW《年月/JT日中文摘要鼠傷寒沙口氏菌聽iV基因編碼的
3、蛋白為合成0-抗原的鼠李糖轉(zhuǎn)移酶,它負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)贏李糖。我們構(gòu)建了鼠傷寒沙口氏菌所W基因缺失株W及阿拉伯糖調(diào)控所W基因表達(dá)的突變株,并對其進(jìn)行生物學(xué)特性的巧巧研究,主要內(nèi)容可歸納如下:1鼠傷寒沙口氏菌基因缺失株的構(gòu)建鼠傷寒沙口氏菌所W基因大?。梗矗担猓?,我們構(gòu)建了重組自殺性質(zhì)粒YA4286-A/WV,利用自殺性質(zhì)粒介導(dǎo)的同源重組方法p,構(gòu)建了所W基因缺失株。:/LPS圖譜顯示,A/:/ZW缺失株沒有完整的LPS,其LPS結(jié)構(gòu)包括類脂A、核也多一5a-W糖和個半乳糖。我們構(gòu)建了1聽iV回補(bǔ)質(zhì)粒,將其電轉(zhuǎn)化入A/yZ缺失株,LPS圖譜顯示-;Z,1
4、5aW回補(bǔ)質(zhì)粒能夠恢復(fù)AiV缺失株的LPS結(jié)構(gòu):/辦,表明成功構(gòu)建訴7V基因缺失株。2鼠傷寒沙口氏菌阿拉伯糖調(diào)控ryWV基因突變株的構(gòu)建我們通過改造詩W基因的SD序列和起始密碼子,構(gòu)建了重組自殺性質(zhì)粒-YA4286-M利用自殺:TTaraCPTp4pa婦BAD々性質(zhì)粒介導(dǎo)的同源重姐方法,構(gòu)建了兩株阿拉伯糖調(diào)控所W基因表達(dá)的突變株:A所如::TTaraCPBAD^ySM起始密碼子ATG)和A/卿V/V雌Z::TTflmCPBAD所W(起始密碼子GTG)。在有阿拉伯糖存在條件下,At押JVAPfl站::TTamCPbad坤W(起始密碼子ATG)
5、突變株,調(diào)控表達(dá)基因,使細(xì)菌能夠合成完整的LPS;而沒有阿拉伯糖的條件下,所W基因不表達(dá),其LPS表型與A/娜iV株相同。然而,在有阿拉伯糖存在條件下,Ar/&iV/VflgZ::TTflraCPBADryWV(起始密碼子GTG)突變株,娜iV基因少量表達(dá),細(xì)菌沒有完全恢復(fù)LPS結(jié)構(gòu)。3鼠傷寒沙口氏菌突變株生物學(xué)特性硏究為了解析基因?qū)κ髠晨谑暇飳W(xué)特性的影響,我們系統(tǒng)地比較了突變株與野生株在生長曲線、泳動與群集、對多粘菌素B的抵抗力、粘附與入侵及毒力這幾個方面的差異。結(jié)果表明ZW缺失株與TT<C,A/y社::3raPbadt^ZW(
6、起始密碼子ATG)突變株在體外生長曲線、細(xì)胞粘附率、細(xì)胞入侵率與野生株無顯著性差異。相比之下,iV基因缺失后辦,菌株的泳動和群集能力顯著下降(PO.OOl),在多粘菌素B作用下的存活率顯著下降(PcO.OOl),毒力I下降。同時,在阿拉伯糖存在條件下,A所WApfl紅::TTflraCPBAD/聽W(起始密碼子ATG)突變株的泳動和群集能力得到提升,而完全恢復(fù)對多粘菌素B的抵抗力。綜上所述,我們證實(shí),如?;虻娜笔κ髠晨谑暇捏w外繁殖、粘附與入侵沒有影響,卻能顯著降低細(xì)菌的毒力和對生物活性物質(zhì)的抵抗力。關(guān)鍵詞鼠傷寒沙口氏菌,生物學(xué)特性,
7、所W,調(diào)控延遲減毒IIConstrue材onandPreliminaryEvalua材onofBioloicalgcharacteristicsofrfbNGenemutantofSalmonellaentericaserovarTyphimuriumABSTRCT-nRhamnoseaimortantcomponentofGatie打,istransferredb出amnose,pgy化ansferasewhichwas