泥蚶smad15、bmp24基因的克隆、表達分析及生長性狀相關(guān)snp位點篩選

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1、學(xué)校代碼：10264研究生學(xué)號：M120150380上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文泥蚶Smad1/5、BMP2/4基因的克隆、題目：表達分析及生長性狀相關(guān)SNP位點篩選CloningandspatiotemporalexpressionanalysisofSmad1/5,BMP2/4geneand英文題目：growthtraitsrelatedSNPscreeningintheTegillarcagranosa專業(yè)：漁業(yè)研究方向：貝類分子遺傳育種姓名：錢雪駿指導(dǎo)教師：林志華研究員二O一五年六月一日上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文上海海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道

2、德，崇尚嚴(yán)謹學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內(nèi)容負責(zé)，并完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手

3、段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本版權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密□學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文上海海洋大學(xué)博/碩士學(xué)位論文答辯委員會成員名單姓名工作單位職稱備注尤仲杰寧波海洋與漁業(yè)研究院研究員主席李成華寧波大學(xué)教授委員王偉浙江萬里學(xué)院副教授委員委員委員委員委員董迎輝浙江萬里學(xué)院副研究員秘書答辯地點浙江萬里學(xué)院64#205答辯日期2015.06.05上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文泥蚶Smad1/5、BMP2/4基因的克隆、表達分析及生長性狀相關(guān)SNP位點篩選摘要泥蚶（Tegillarcagranosa）是我國四大傳

4、統(tǒng)養(yǎng)殖貝類之一，具有較高的營養(yǎng)價值和藥用價值，深受沿海地區(qū)居民的喜愛。但是目前，對包括泥蚶在內(nèi)的軟體動物的生長調(diào)控機制尚不清楚，進而制約了高效率的快速生長性狀定向培育優(yōu)良品種的分子標(biāo)記輔助育種技術(shù)研發(fā)進程。轉(zhuǎn)化生長因子β(transforminggrowthfactorβ，TGF-β)超家族是一組結(jié)構(gòu)相關(guān)性的多功能細胞因子，在細胞增殖、分化和生長等生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用。該超家族中具有眾多生長相關(guān)功能基因，本研究就對其中的Smad1/5基因和BMP2/4基因在泥蚶中的作用機制展開了探究，以期為泥蚶分子標(biāo)記輔助育種（molecularmarker-assistedsel

5、ection，MAS）提供理論基礎(chǔ)，使育種更具針對性，縮短泥蚶育種周期，降低育種成本，改進傳統(tǒng)選育技術(shù)，大力發(fā)展泥蚶健康養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)。研究結(jié)果如下：1.獲得Smad1/5基因的cDNA全長、基因組結(jié)構(gòu)及其時空表達特征。利用RACE方法克隆得到泥蚶Smad1/5基因（Tg-Smad1/5）的cDNA全長序列（GenBank登錄號：KP250873），該序列全長2424bp，開放閱讀框（openreadingframe，ORF）有1386bp，編碼462個氨基酸。Tg-Smad1/5蛋白與雙殼貝類中合浦珠母貝（Pinctadafucata）、太平洋牡蠣（CrassostreaI

6、上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文gigas）的同源性分別達到了92.3%、91.2%。在cDNA序列基礎(chǔ)上，利用普通PCR方法克隆獲得了Tg-Smad1/5基因的3個內(nèi)含子，大小分別為504bp，553bp，874bp，均屬于GT-AG-內(nèi)含子。利用染色體步移（genomewalking）技術(shù)克隆得到泥蚶Smad1/5基因啟動子序列，該片段長從5’末端到起始密碼子ATG的長度為934bp，包含GATA框、八聚體轉(zhuǎn)錄因子（Oct-1）等結(jié)構(gòu)，符合啟動子序列特征。利用實時熒光定量PCR（real-timefluorescencequanititativePCR，qRT-PCR）技術(shù)

7、，研究了Smad1/5基因在泥蚶6個組織和9個發(fā)育時期中的表達情況，結(jié)果顯示，Tg-Smad1/5基因在泥蚶成貝6個組織中均有表達，而在斧足中的表達量最高，極顯著地高于其他組織；在各發(fā)育時期中，Tg-Smad1/5表達量隨發(fā)育進程呈逐漸升高的趨勢，在眼點幼蟲期達到最高，極顯著高于其他時期，而在變態(tài)至稚貝時，表達量又極顯著地下降。研究結(jié)果表明，Tg-Smad1/5具有類似于高等動物的分子結(jié)構(gòu)，并在泥蚶不同組織、不同發(fā)育時期表達有所差異，這為進一步研究該基因在貝類中的功能和作用機制奠定了重要基礎(chǔ)。2.BMP2/4基因的擴增及其時空表達特征的研