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1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文蘋(píng)果果實(shí)酸度相關(guān)基因的篩選、克隆及表達(dá)分析姓名：姚玉新申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：果樹(shù)學(xué)指導(dǎo)教師：翟衡20060515LBLufia—bertanimediumLB培養(yǎng)基MOPS3-(N—morphplino)propanesulfonic3-N嗎啉代丙磺酸MEMalicacidenzyme蘋(píng)果酸酶mRNAMessageRNA信使RNANADHReducedNicotinamideAdenine還原型輔酶IDinucleofideNaAcSodiumacetate醋酸鈉NILNearisogenielines近等基
2、因系NP．40NonidetP．40潤(rùn)濕劑P-40PAGEPolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝膠電泳PCRPolymerasechainreaction聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PMSFPhenylmethylSulfonyFluoride苯甲基磺酰氟PVPPolyvinylpyrrolidone聚乙烯吡咯烷酮QTLQuantitativetraitloci數(shù)量性狀位點(diǎn)RNaseARibonucleaseA核糖核酸酶ArpmRevolutionsperminute轉(zhuǎn)／分鐘RT．PCRReversetrans
3、criptativePCR反轉(zhuǎn)錄PCRSDSSodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸鈉SDS-PAGESDSpoly—acrylamidegeleleclxophoresisSDS聚丙烯酰胺凝膠電泳SSRSimplesequencerepeat簡(jiǎn)單序列重復(fù)TAE"Iris—HCl．EDTAbufferTris．乙酸-EDTA緩沖液TBETris—Boricacid—EDTAbufferTris一硼酸．EDTA緩沖液TETris．HCI．EDTAbufferTris．HCl-'EDTA緩沖液TEMEDN,N．N’N'-Tet
4、rarnethylethylenediamineN，N，N’，N’一四甲基乙二胺TrisTtrishydryxymethylaminomethane三羥甲基氨基甲烷V-PpaseVacuolarH+-pyrophospbatase液泡型對(duì)·焦磷酸酶X．鯽5-Bromo-4．chloro．3．indolyl—p-D．鰣actos5-溴-4一氯一3_哼l哚一13一D，半乳糖苷ide關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對(duì)在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，
5、均在文中明確說(shuō)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：B期：叢．，學(xué)“勺幽戳山東農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文摘要蘋(píng)果(MalusdomesticaB．)是世界上最重要的鮮食和加工果品之一。蘋(píng)果和以蘋(píng)果濃縮汁為主的加工業(yè)成為我國(guó)加
6、入世貿(mào)組織以后最具國(guó)際市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力的優(yōu)勢(shì)農(nóng)產(chǎn)品之一。我國(guó)長(zhǎng)期以鮮食蘋(píng)果栽培為主，主栽品種如富士系列、元帥系列、嘎啦系列等均偏甜而少酸，導(dǎo)致加工產(chǎn)品酸度低，出口效益較低，生產(chǎn)上迫切需要發(fā)展適宜加工的酸度高的品種。為了研究蘋(píng)果酸度調(diào)控機(jī)制，本文利用分子標(biāo)記、分析代謝關(guān)鍵酶和cDNA．AFLP差異顯示的方法對(duì)控制果實(shí)酸度的基因進(jìn)行了研究。主要結(jié)果如下：1．蘋(píng)果果實(shí)酸月E(低)酸性狀的SSR標(biāo)記分析利用蘋(píng)果上開(kāi)發(fā)的140對(duì)SSRgI物對(duì)東光和富士的F1代群體進(jìn)行了酸、非酸性狀的分子標(biāo)記篩選，得到一個(gè)與果實(shí)酸性狀連鎖的SSR標(biāo)記(CH03d12)
7、，遺傳距離為8．89cM。共顯性分析表明酸(脅)對(duì)非酸∞∞為完全顯性。2．熱硼酸法提取蘋(píng)果果實(shí)RNA的改良在原熱硼酸法的基礎(chǔ)上加入一些提取輔助劑并根據(jù)輔助劑的特性?xún)?yōu)化提取步驟，改良后的方法可以有效去除蛋白和多糖，從而可以從不同發(fā)育階段的蘋(píng)果果實(shí)中高效、穩(wěn)定的提取高質(zhì)量的RNA，所得RNA的A：。惋。大于2．0，A2；dA：。介于1．8．2．1之間。所得RNA產(chǎn)量高，其中前期果實(shí)RNA產(chǎn)率在13．40lag／g之上，后期果實(shí)RNA產(chǎn)率在7．02Ixg／g之上。3．蘋(píng)果果實(shí)細(xì)胞質(zhì)型蘋(píng)果酸脫氫酶(cyMDH)基因的分離及其特征利用不同物種的
8、同源序列設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，通過(guò)RT-PCR和RACE．PCR技術(shù)分離了富士蘋(píng)果果實(shí)中的細(xì)胞質(zhì)型蘋(píng)果酸脫氫酶基因，命名為Mal．-cyMDH,其全長(zhǎng)為1,246bp，GenBank注冊(cè)號(hào)為DQ221207，基因組序列分析表明編
