桃果實(shí)果膠裂解酶基因pppls的克隆及表達(dá)分析

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1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)CloningandExpressionAnalysisofPectateLyaseGenePpPLsofPeachFruit‘’、1’submittedt01nestsSbmlttetoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomy1一一YuanChenglong(DepartmentofHorticulture)Supervisor：DongXiaoying；DuanYanxinQingdao．Chma

2、June，2013萬(wàn)方數(shù)據(jù)獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得青島農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研究生簽名：時(shí)間：礦)弓關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明年歷穆本人完全了解青島農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手

3、段保存、匯編學(xué)位論文。同意青島農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。研究生簽名：／秀-、√巷刷醛孫茲吃輕時(shí)間：研年么月冶時(shí)間：>刃多年么月7彩日萬(wàn)方數(shù)據(jù)青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要摘要桃果實(shí)是典型呼吸躍變型果實(shí)，采后軟化進(jìn)程迅速，掌握桃果實(shí)成熟軟化的分子機(jī)理，有望在較短時(shí)間內(nèi)培育出品質(zhì)更加優(yōu)良的硬肉桃品種，這對(duì)提高果實(shí)綜合品質(zhì)、增強(qiáng)我國(guó)水果的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力具有重要意義。本研究以硬肉桃新品種‘雙久紅’果實(shí)為試材，以常規(guī)優(yōu)良品種‘川中島’為對(duì)照，研究了果實(shí)采后貯藏期間質(zhì)地變化；同時(shí)，克隆了4個(gè)果膠裂解酶PpPLs基

4、因，利用實(shí)時(shí)定量Real-TimeRT-PCR技術(shù)分析了這些基因在果實(shí)成熟前后過(guò)程中及采后貯藏期間的動(dòng)態(tài)表達(dá)，并研究了不同激素處理對(duì)這些基因表達(dá)的影響，主要研究結(jié)果如下：1．TPA質(zhì)構(gòu)分析桃果實(shí)貯藏期間質(zhì)地變化應(yīng)用TPA測(cè)試法，對(duì)硬肉桃‘雙久紅’及其母本‘川中島’果實(shí)在貯藏期間的質(zhì)地變化進(jìn)行分析表明：硬肉桃‘雙久紅’果實(shí)的硬度，粘力，粘性，咀嚼性均顯著高于“川中島”的；而硬度形變量與對(duì)照的呈相反的變化趨勢(shì)。相關(guān)性分析表明，果實(shí)粘力、粘性、咀嚼性與硬度都具有極顯著的相關(guān)性，而硬度形變量與硬肉桃果實(shí)硬度呈極顯著負(fù)相關(guān)，與軟肉桃果實(shí)硬度呈極顯著正相

5、關(guān)，說(shuō)明這些指標(biāo)可用于檢測(cè)果實(shí)質(zhì)地變化。乙烯利(50mg／L)、NAA(50mg／L)和ABA(50mg／L)均不同程度促進(jìn)了兩品種桃果實(shí)的軟化，乙烯利和NAA處理促進(jìn)了乙烯的釋放，ABA處理抑制了‘雙久紅’桃果實(shí)中乙烯的釋放。2．桃果實(shí)中PpPLs基因的克隆根據(jù)GenBank登錄的桃PpPLs基因序列PpPLI(EF568780．1)和PpPL2(GU462127．1)，在兩品種桃果實(shí)中成功克隆到PpPLl和PpPL2基因。又根據(jù)本課題組已構(gòu)建的SSH文庫(kù)進(jìn)行差異篩選得到的1條桃果膠裂解酶的eDNA片段，通過(guò)電子克隆獲得一條長(zhǎng)度為1734b

6、p的片段，暫命名為PpPL3,其ORF為1692bp，編碼563個(gè)氨基酸；根據(jù)已知序列(BU042038．1)克隆得到一條長(zhǎng)度為1441bp的片段，暫命名PpPL4,其ORF為1128bp，編碼375個(gè)氨基酸。3．桃果實(shí)中PpPLs基因的實(shí)時(shí)定量表達(dá)組織特異性表達(dá)分析表明，‘川中島’中4個(gè)PpPL基因可能與雌雄蕊發(fā)育有關(guān)，在‘雙久紅’果實(shí)中，則可能與幼果的發(fā)育密切相關(guān)。成熟過(guò)程中，PpPLl和PpPL2表達(dá)水平較高，起到了重要作用，尤其是‘川中島’中，PpPLl和PpPL2協(xié)同作用加快了果實(shí)成熟軟化。‘雙久紅’桃果實(shí)的軟化可能與PpPL3和P

7、pPL4的表達(dá)密切相關(guān)。貯藏過(guò)程中，訓(xùn)中島’中PpPLl和PpPL2在前期發(fā)揮作用，之后主要由于印此了和PpPL4的表達(dá)，導(dǎo)致果實(shí)的軟化和衰老?！p久紅’桃果實(shí)中4萬(wàn)方數(shù)據(jù)青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要個(gè)基因在貯藏期間均發(fā)揮了重要作用。關(guān)鍵詞：桃果實(shí)；成熟；果膠裂解酶；基因克隆；表達(dá)分析萬(wàn)方數(shù)據(jù)AbstractPeaCh(PrunusPersicaL．)fruitisakindofclimactericfruit，thepostharvestsofteningprocessquickly．Masteringthemolecularmecha

8、nismoffruitripeningandsofteningofpeach，maybecontributedtobreedamoreexcellentqualit