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《麻類(lèi)脫膠高效菌株果膠裂解酶基因克隆與表達(dá).pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、微生物學(xué)通報(bào)Aug．20，2013，40(8)：1403—1413MicrobiologyChina◎2013byInstituteofMicrobiology．CAStongbao@im．a(chǎn)c．cn麻類(lèi)脫膠高效菌株果膠裂解酶基因克隆與表達(dá)成莉鳳劉正初段盛文馮湘沅鄭科鄭霞程毅(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類(lèi)研究所湖南長(zhǎng)沙410205)摘要：【目的】克隆麻類(lèi)脫膠高效菌株Dickeyasp．DCE一01的果膠裂解酶基因并進(jìn)行原核表達(dá)，對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化和酶學(xué)性質(zhì)研究?！痉椒ā扛鶕?jù)該菌株全基因組序列預(yù)測(cè)的果膠裂解酶基因Q59419設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增后將該基
2、因連接到pEASY-E1和pACYCDuet一1載體上，導(dǎo)入E．coliBL21(DE3)進(jìn)行表達(dá)。選擇酶活力高的陽(yáng)性克隆子進(jìn)行大量誘導(dǎo)表達(dá)后，采用超濾和SephadexG—lo0凝膠層析兩步法純化出果膠裂解酶，研究其酶學(xué)性質(zhì)。【結(jié)果】克隆到果膠裂解酶基因pel(GenBank登錄號(hào)：JX964997)，其序列全長(zhǎng)1128bp，編碼375個(gè)氨基酸。pACYCDuet一1-pel-BL表達(dá)胞外果膠裂解酶活力最高，發(fā)酵液粗酶活達(dá)298．8IU／mL。其最適反應(yīng)溫度為50。C，最適pH為9．0；保溫lh，酶活穩(wěn)定溫度≤45。C，穩(wěn)定pH為9．0-
3、10．0。酶催化作用依賴于ca2+，其最適作用濃度為2mmol／L；Zn2+、Ca和NH4+促進(jìn)酶活力，F(xiàn)e。和Pb嚴(yán)重抑制酶活力；聚半乳糖醛酸鈉為該酶的最適底物?！窘Y(jié)論】從麻類(lèi)脫膠高效菌株中發(fā)掘到堿性果膠裂解酶基因，其表達(dá)產(chǎn)物在生物質(zhì)加工過(guò)程中具有重要工業(yè)化應(yīng)用前景。關(guān)鍵詞：麻類(lèi)脫膠，高效菌株，果膠裂解酶，基因克隆，酶學(xué)性質(zhì)基金項(xiàng)目：國(guó)家863計(jì)劃項(xiàng)目(No．2006AA02Z249)；國(guó)家麻類(lèi)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目(No．CARS一19一E24)通訊作者：Tel：86—731—88998535；Fax：86-731．88998528；
4、函：ibfclzc@189．cn收稿日期：2012—10．31：接受日期：2012．12．061404微生物學(xué)通報(bào)Microbio1．China2013，Vo1．40，No．8~J?51oninganc1Iexpressl●on0tnapect-ate一lyasegenef一romaneficientstrainforbastfiberbio-·extractingCHENGLi-FengLIUZheng．ChuDUANSheng—WenFENGXiang．YuanZHENGKeZHENGXiaCHENGYi(InstituteofBast
5、FiberCrops，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Changsha，Hunan410205，China)Abstract：【Objective1Weclonedandexpressedthepectatelyasegenee1)fromDickeyasp．DCE一01astrainforbastfiberbio—extracting，inE．coliBL21(DE3)．Thenwecharacterizedthepurifiedpectatelyase(Pe1)．【Methods】Primers
6、weredesignedbythepotentialpelQ59419annotatedfromthewholegenomesequenceofDickeyasp．DCE一01．ThepelwasclonedlinkedtopEASY-E1andpACYCDuet一1，andexpressedinE．coliBL21(DE3)．Aftercompar—ingtheactivitiesofextracellularPelfromtheengineeringstrains，thePelwithhighestactivitywaspurified
7、bythetwo—stepprocessinvolvingultrafiltrationandgelfiltration(SephadexG一100)andthencharacterized．【ResultslThepel(GenBank：JX964997)was1128bpandencoded375aminoacids．ThehighestactivityoftheextracellularPelfrompACY—CDuet一1-pel—BLstrainwas298．8IU／mL．Theoptimalconditionforthepuri
8、fiedenzymewasat5O。C，pH9．0andpolygalacturonicacidsodiumasasubstrate．Thecatalyticactivityof
