資源描述：
《文蛤snp位點的開發(fā)和酪氨酸酶基因的克隆及表達分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、浙江萬里學(xué)院碩士專業(yè)學(xué)位論文題目:文蛤SNP位點的開發(fā)和酪氨酸酶基因的克隆及表達分析Title:ThedevelopmentofSNPandthecloneandexpressionanlysisoftyrosinasegeneinhardclamMeretrixmeretrix研究生姓名：井巖校內(nèi)導(dǎo)師：林志華研究員校外導(dǎo)師：沈龐幼高級工程師專業(yè)學(xué)位類別：工程碩士專業(yè)學(xué)位領(lǐng)域：生物工程所在學(xué)院：生物與環(huán)境學(xué)院論文提交日期2015年12月31日中圖分類號：S968.31單位代碼：10876學(xué)號：2013881002密級：
2、公開浙江萬里學(xué)院碩士專業(yè)學(xué)位論文題目:文蛤SNP位點的開發(fā)和酪氨酸酶基因的克隆及表達分析Title:ThedevelopmentofSNPandthecloneandexpressionanlysisoftyrosinasegeneinhardclamMeretrixmeretrix研究生姓名：井巖校內(nèi)導(dǎo)師：林志華研究員校外導(dǎo)師：沈龐幼高級工程師專業(yè)學(xué)位類別：工程碩士專業(yè)學(xué)位領(lǐng)域：生物工程所在學(xué)院：生物與環(huán)境學(xué)院論文提交日期2015年12月31日文蛤SNP位點的開發(fā)和酪氨酸酶基因的克隆及表達分析論文作者簽名:指導(dǎo)教師簽
3、名:答辯委員會主席：上海交通大學(xué)委員1：寧波市海洋與漁業(yè)研究院委員2：浙江萬里學(xué)院委員3：浙江萬里學(xué)院委員4：浙江萬里學(xué)院答辯日期：2015年12月24日浙江萬里學(xué)院碩士專業(yè)學(xué)位論文摘要摘要文蛤（MeretrixmeretrixLinnaeus），是我國主要養(yǎng)殖貝類之一，因其肉質(zhì)鮮美，營養(yǎng)豐富，素有“天下第一鮮”之稱，深受沿海居民喜愛，是出口的主要海產(chǎn)品之一。本文利用文蛤的轉(zhuǎn)錄組文庫，開發(fā)了166個EST-SNP位點，為文蛤的遺傳多樣性研究和遺傳育種提供了可利用的分子標記資源；還克隆了文蛤黑色素合成相關(guān)的酪氨酸酶的基因
4、并對其表達量進行了分析，為文蛤殼色的研究提供了參考。1、基于轉(zhuǎn)錄組的166個文蛤多態(tài)性EST-SNP標記的開發(fā)文蛤的轉(zhuǎn)錄組測序得到164789個轉(zhuǎn)錄本，經(jīng)過拼接后共獲得94525個unigene序列，通過變異檢測軟件進行SNPCalling，共獲得416989個EST-SNP候選位點。依據(jù)引物設(shè)計原則，隨機選取候選的SNP位點設(shè)計了445對引物。其中238對引物在文蛤基因組中獲得單一的目的擴增條帶，在文蛤群體驗證分型中191對引物獲得準確分型，166個位點為多態(tài)性位點。觀測雜合度和期望雜合度分別為0.0000到0.76
5、67和0.1831到0.5085，最小等位基因頻率從0.1000到0.5000變化。其中76個SNP位點顯著地偏離哈溫-伯格平衡(P<0.05)。本研究為文蛤的遺傳多樣性研究和分子標記輔助育種提供了可利用的分子標記資源。2、文蛤酪氨酸酶基因cDNA全長的克隆及分析酪氨酸酶(TYR)是動物黑色素生物合成過程的重要酶，在貝類殼色的形成中起著重要的作用。利用RACE技術(shù)對從文蛤轉(zhuǎn)錄組文庫中檢索到的TYR基因cDNA片段進行擴增，經(jīng)過對測序結(jié)果的拼接得到了長為2406bp的TYR基因cDNA全長序列，ORF分析表明TYR包括4
6、2bp的5'-非編碼區(qū)(5'-UTR)，2067bp的開放閱讀框(ORF)，297bp的3'-非編碼區(qū)(3'-UTR)，3'-序列在距離加尾信號AATAAA140bp處發(fā)現(xiàn)了polyA尾巴。經(jīng)生物信息軟件的分析表明，TYR可編碼689個氨基酸，分子量為78.25kDa，理論等電點為6.69，存在信號肽序列，無跨膜區(qū)域。用普通PCR方法對已經(jīng)克隆得到的TYR基因的內(nèi)含子進行克隆，測序后得到3個內(nèi)含子，大小分別為807bp、754bp和328bp，均屬于GT-AG內(nèi)含子。利用熒光定量PCR對文蛤4中殼色中TYR基因的表達差
7、異性分析顯示，TYR在黑殼中表達量最高，且與白殼，粉殼和紅殼中的表達量有極顯著差異(P<0.01)。關(guān)鍵詞：文蛤；EST-SNP；HRM；酪氨酸酶；基因克隆I浙江萬里學(xué)院碩士專業(yè)學(xué)位論文ABSTRACTABSTRACTThehardclam,MeretrixmeretrixLinnaeus,isoneofthemajorediblefarmingshellfish.Itisoneofthemainseaoutletproductsknownas“Themostdeliciousdishintheworld”becaus
8、eofitsdelicatemeatandnutritionnourishingandislovedbythepeopleathomeandabroad.Inthispaper,wedeveloped166EST-SNPlocibasedonM.meretrixtranscriptomesequencing,whichprovid
