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1、...頁(yè)眉變異鏈球菌蛋白質(zhì)提取方法研究變異鏈球菌蛋白質(zhì)提取方法研究作者：何永紅田曉蓓萬(wàn)呼春溫艷麗張菲菲馬琴睿作者單位：1.口腔疾病研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川大學(xué)；2.四川大學(xué)華西口腔醫(yī)院綜合治療科，四川成都610041【摘要】目的建立穩(wěn)定、有效的提取變異鏈球菌蛋白質(zhì)方法。方法以裂解液為提取介質(zhì)，分別采用反復(fù)凍融超聲、超聲、熱裂解和熱裂解超聲4種方法提取細(xì)菌蛋白質(zhì)，通過(guò)分析細(xì)菌破碎程度、蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳及蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度，比較各提取方法的效果。結(jié)果除熱裂解法外，其他3種方法均可有效裂解細(xì)菌，其中超聲起主要作用，同時(shí)這3種方法提取蛋白質(zhì)的SDS-PAGE條
2、帶分布基本相同，但反復(fù)凍融超聲法提取蛋白質(zhì)條帶豐度最高。蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度測(cè)定顯示，反復(fù)凍融超聲法提取蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度最高。4種方法均具有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。結(jié)論反復(fù)凍融超聲法可以有效提取變異鏈球菌蛋白質(zhì)，有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，且操作簡(jiǎn)單?！娟P(guān)鍵詞】變異鏈球菌蛋白質(zhì)組超聲 StudyonproteinextractionmethodsforStreptococcusmutansHEYong-hong1,TIANXiao-bei1,WANHu-chun2,WENYan-li2,ZHANGFei-fei2,MAQin-rui2.（1.StateKeyLabora
3、toryofOralDiseases,SichuanUniversity,Chengdu610041,China;2.Dept.ofGeneralTreatment,WestChinaCollegeofStomatology,Sichuan....頁(yè)腳...頁(yè)眉University,Chengdu610041,China） [Abstract]ObjectiveToestablishanefficientandstablemethodforproteinextractionofStreptococcusmutans.MethodsThecollectedb
4、acteriaweretreatedbyfreeze-thawandultrasonic（method1）,ultrasonic（method2）,boiling（method3）,boilingandultrasonic（method4）,respectively.Theindexsuchasstateofbacteriabroken,concentrationofextractedproteinandSDS-PAGEofproteinwereemployedtoevaluatetheeffectsofabovefourmethods.ResultsBes
5、idethemethod3,theotherthreemethodscouldbreakthebacteriaeffectively,ofwhichultrasonicwasthekeyfactor.ThepatternofSDS-PAGEwhichtreatedbymethod1,method2andmethod4wasalmostsame,butmethod1resultedinthebestabundance.Therewassignificantlydifferenceamongthefourproteinconcentrationextracted
6、byfourmethods（P<0.05）.Allmethodsexhibitedgoodstabilityandreproducibility.ConclusionMethodoffreeze-thawandultrasonicresultedinanefficientproteinsextractionofStreptococcusmutanswhichdemonstratedgoodstabilityandreproducibilityandeasytohandle. [Keywords]Streptococcusmutans；proteomics；u
7、ltrasonic 目前國(guó)內(nèi)外對(duì)變異鏈球菌（簡(jiǎn)稱變鏈菌）（Strep-tococcus....頁(yè)腳...頁(yè)眉mutans，S.mutans）的研究已經(jīng)進(jìn)展到蛋白質(zhì)組水平[1-6]，蛋白質(zhì)組研究的第一步是對(duì)研究對(duì)象的蛋白質(zhì)進(jìn)行最大程度的提取，因此對(duì)細(xì)菌蛋白質(zhì)進(jìn)行有效提取是變鏈菌蛋白質(zhì)組研究的關(guān)鍵步驟。目前文獻(xiàn)報(bào)道的提取方法主要有反復(fù)凍融、超聲裂解和熱裂解法[1-5]。本研究在參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)基礎(chǔ)上，對(duì)變鏈菌蛋白質(zhì)提取方法進(jìn)行比較研究，以期探索一種穩(wěn)定有效的提取方法，為該菌后期的蛋白質(zhì)組研究奠定基礎(chǔ)。1材料和方法 1.1主要材料和儀器 變異鏈球菌ATCC25
8、175（四川大學(xué)口腔疾病研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供）。T
