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《變異鏈球菌蛋白質(zhì)提取方法研究分析》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、...頁(yè)眉變異鏈球菌蛋白質(zhì)提取方法研究變異鏈球菌蛋白質(zhì)提取方法研究作者:何永紅田曉蓓萬(wàn)呼春溫艷麗張菲菲馬琴睿作者單位:1.口腔疾病研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川大學(xué);2.四川大學(xué)華西口腔醫(yī)院綜合治療科,四川成都610041【摘要】目的建立穩(wěn)定、有效的提取變異鏈球菌蛋白質(zhì)方法。方法以裂解液為提取介質(zhì),分別采用反復(fù)凍融超聲、超聲、熱裂解和熱裂解超聲4種方法提取細(xì)菌蛋白質(zhì),通過(guò)分析細(xì)菌破碎程度、蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳及蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度,比較各提取方法的效果。結(jié)果除熱裂解法外,其他3種方法均可有效裂解細(xì)菌,其中超聲起主要作用,同時(shí)這3種方法提取蛋白質(zhì)的SDS-PAGE條
2、帶分布基本相同,但反復(fù)凍融超聲法提取蛋白質(zhì)條帶豐度最高。蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度測(cè)定顯示,反復(fù)凍融超聲法提取蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度最高。4種方法均具有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。結(jié)論反復(fù)凍融超聲法可以有效提取變異鏈球菌蛋白質(zhì),有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性,且操作簡(jiǎn)單?!娟P(guān)鍵詞】變異鏈球菌蛋白質(zhì)組超聲 StudyonproteinextractionmethodsforStreptococcusmutansHEYong-hong1,TIANXiao-bei1,WANHu-chun2,WENYan-li2,ZHANGFei-fei2,MAQin-rui2.(1.StateKeyLabora
3、toryofOralDiseases,SichuanUniversity,Chengdu610041,China;2.Dept.ofGeneralTreatment,WestChinaCollegeofStomatology,Sichuan....頁(yè)腳...頁(yè)眉University,Chengdu610041,China) [Abstract]ObjectiveToestablishanefficientandstablemethodforproteinextractionofStreptococcusmutans.MethodsThecollectedb
4、acteriaweretreatedbyfreeze-thawandultrasonic(method1),ultrasonic(method2),boiling(method3),boilingandultrasonic(method4),respectively.Theindexsuchasstateofbacteriabroken,concentrationofextractedproteinandSDS-PAGEofproteinwereemployedtoevaluatetheeffectsofabovefourmethods.ResultsBes
5、idethemethod3,theotherthreemethodscouldbreakthebacteriaeffectively,ofwhichultrasonicwasthekeyfactor.ThepatternofSDS-PAGEwhichtreatedbymethod1,method2andmethod4wasalmostsame,butmethod1resultedinthebestabundance.Therewassignificantlydifferenceamongthefourproteinconcentrationextracted
6、byfourmethods(P<0.05).Allmethodsexhibitedgoodstabilityandreproducibility.ConclusionMethodoffreeze-thawandultrasonicresultedinanefficientproteinsextractionofStreptococcusmutanswhichdemonstratedgoodstabilityandreproducibilityandeasytohandle. [Keywords]Streptococcusmutans;proteomics;u
7、ltrasonic 目前國(guó)內(nèi)外對(duì)變異鏈球菌(簡(jiǎn)稱變鏈菌)(Strep-tococcus....頁(yè)腳...頁(yè)眉mutans,S.mutans)的研究已經(jīng)進(jìn)展到蛋白質(zhì)組水平[1-6],蛋白質(zhì)組研究的第一步是對(duì)研究對(duì)象的蛋白質(zhì)進(jìn)行最大程度的提取,因此對(duì)細(xì)菌蛋白質(zhì)進(jìn)行有效提取是變鏈菌蛋白質(zhì)組研究的關(guān)鍵步驟。目前文獻(xiàn)報(bào)道的提取方法主要有反復(fù)凍融、超聲裂解和熱裂解法[1-5]。本研究在參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)基礎(chǔ)上,對(duì)變鏈菌蛋白質(zhì)提取方法進(jìn)行比較研究,以期探索一種穩(wěn)定有效的提取方法,為該菌后期的蛋白質(zhì)組研究奠定基礎(chǔ)。1材料和方法 1.1主要材料和儀器 變異鏈球菌ATCC25
8、175(四川大學(xué)口腔疾病研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供)。T