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1、碩士學(xué)位論文降血糖活性肽制備及抑制α-葡萄糖苷酶活性肽純化與鑒定PREPARATIONOFHYPOGLYCEMICACTIVEPEPTIDESANDPURIFICATIONANDIDENTIFICATIONOFα-GLUCOSIDASEINHIBITORYPEPTIDES趙紅星哈爾濱工業(yè)大學(xué)2018年6月國內(nèi)圖書分類號：TS229學(xué)校代碼：10213國際圖書分類號：66.0密級：公開工學(xué)碩士學(xué)位論文降血糖活性肽制備及抑制α-葡萄糖苷酶活性肽純化與鑒定碩士研究生：趙紅星導(dǎo)師：王榮春副教授申請學(xué)位：工學(xué)碩士學(xué)科：食品科學(xué)與工程所在單位：化工與化學(xué)
2、學(xué)院答辯日期：2018年6月授予學(xué)位單位：哈爾濱工業(yè)大學(xué)ClassifiedIndex:TS229U.D.C:66.0DissertationfortheMasterDegreeinEngineeringPreparationofhypoglycemicactivepeptidesandpurificationandidentificationofα-glucosidaseinhibitorypeptidesCandidate：ZhaoHongxingSupervisor：AssociateProf.WangRongchunAcademicD
3、egreeAppliedfor：MasterofEngineeringSpeciality：FoodScienceandEngineeringAffiliation：SchoolofChemistryandChemicalEngineeringDateofDefence：June，2018Degree-Conferring-Institution：HarbinInstituteofTechnology哈爾濱工業(yè)大學(xué)工學(xué)碩士學(xué)位論文摘要糖尿病被稱為健康殺手，對人體造成很大的威脅。目前對糖尿病只能治療，未能治愈，糖尿病患者長期高血糖會引起一系列并
4、發(fā)癥，慢性心血管疾病，慢性腎衰竭及視網(wǎng)膜損傷等而喪失生命。研究通過抑制體內(nèi)產(chǎn)生葡萄糖的酶（α-葡萄糖苷酶和DPP-IV酶），間接阻止葡萄糖進(jìn)入血液循環(huán)而引起高血糖。酶的抑制源于生物反應(yīng)，因而目標(biāo)聚集在源于天然動植物蛋白中的生物活肽，這種小肽相比于原蛋白質(zhì)具有多種生物活性，無復(fù)雜空間結(jié)構(gòu)，理化性質(zhì)穩(wěn)定，且分子鏈段小易于人體吸收，為治療糖尿病提供了安全，有效的新途徑。本研究目的是以天然蛋白質(zhì)為原料，利用酶解法制備具有降糖活性的多肽，本研究以抑制α-葡萄糖苷酶活性為指標(biāo)，確定了多肽制備的方法。同時實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該多肽還具有抗氧化及降壓活性，且消化過程
5、對降糖、降壓和抗氧化活性有一定促進(jìn)的作用。本研究對具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的多肽片段進(jìn)行純化、鑒定及活性驗(yàn)證。以乳清濃縮蛋白、綠豆分離蛋白及大豆分離蛋白為肽源,利用α-葡萄糖苷酶抑制活性和水解度兩個指標(biāo)對不同肽進(jìn)行篩選，大豆分離蛋白經(jīng)堿性蛋白酶水解8h得到的多肽溶液α-葡萄糖苷酶抑制活性最好，抑制率達(dá)到53.79±1.14%。因此，實(shí)驗(yàn)確定降糖活性多肽的制備方法為（2%）大豆分離蛋白經(jīng)堿性蛋白酶（6000U/g底物）水解8h，水解度為36.84±1.20%。對制備的大豆多肽進(jìn)行了分子量分布測定，結(jié)果表明分子量范圍在180-1000Da的小分
6、子占整體多肽的72.23%，氨基酸結(jié)果分析該多肽的疏水性氨基酸含量占比較高為27.57%，其對于多肽對α-葡萄糖苷酶抑制活性有重要作用。測定了該多肽對二肽基肽酶IV（DPP-IV）抑制率為56.52±0.72%，ACE酶抑制率為35.33±1.64%，對羥自由基清除效果及總還原能力均顯示出較好的生物活性。為了解多肽的消化特性，本實(shí)驗(yàn)研究了多肽經(jīng)胃腸模擬消化后對α-葡萄糖苷酶，DPP-IV和血管緊張素調(diào)節(jié)酶（ACE）抑制活性的影響，結(jié)果顯示這三種生物活性值在胃腸消化刺激后均有不同程度的增加，α-葡萄糖苷酶抑制率由29.04±1.82%顯著上升至
7、77.64±1.53%；DPP-IV酶抑制率由40.85±0.74%上升至47.94±1.02%；ACE酶的抑制率由20.31±1.66%提高至51.43±1.27%。為明確具有α-葡萄糖苷酶活性多肽的氨基酸序列，采用離子交換色譜DEAE-52和葡聚糖凝膠色譜Sephsdex-15進(jìn)行連續(xù)的分離，得到針對于α-葡萄糖苷酶起抑制效果的多肽片段。并使用串聯(lián)質(zhì)譜LC-MS/MS來表征色譜分離純化體系的氨基酸序列。I哈爾濱工業(yè)大學(xué)工學(xué)碩士學(xué)位論文得到了三種LLPLPVLK，SWLRL和WLRL新型α-葡萄糖苷酶抑制肽，IC50分別為237.43±0.
8、52μmol/L,182.05±0.74μmol/L,165.29±0.74μmol/L。因此，從大豆蛋白中水解得到的小肽是可用于控制糖尿病的保健食品中潛在的活性成
