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《誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向角膜上皮樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文題名（中英對(duì)照）：誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向角膜上皮樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究Differentiationofhumanumbilicalcord-derivedmesenchymalstemcellsintocornealepithelial–likecellsinvitro作者姓名：曹賢芬指導(dǎo)教師姓名及學(xué)位、職稱：侯光輝博士教授學(xué)科、專業(yè)名稱：眼科學(xué)眼表與角膜病學(xué)位類型：專業(yè)學(xué)位論文提交日期：論文答辯日期：答辯委員會(huì)主席：論文評(píng)閱人：學(xué)位授予單位和日期：獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)
2、位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得暨南大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解暨南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)暨南大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或
3、部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。（保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書）學(xué)位論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：簽字日期：年月日簽字日期：年月日學(xué)位論文作者畢業(yè)后去向：工作單位：電話：通訊地址：郵編：暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要目的研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（humanumbilicalcord-derivedmesenchymalstemcells，hUCMSCs）向角膜上皮樣細(xì)胞分化的可行性研究。方法1.IV型膠原酶消化法分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCMSCs
4、)，對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。并通過細(xì)胞表型和多潛能誘導(dǎo)分化鑒定hUC-MSCs。2.分別采用胰酶消化法和組織塊貼壁法獲取兔角膜上皮細(xì)胞（cornealepithelialcellsRECEs），倒置顯微鏡觀察其形態(tài)和生長狀態(tài)，CCK8法測定RECEs的增殖活性，免疫熒光檢測其角膜上皮細(xì)胞特異性角蛋白CK3+12的表達(dá)。3.將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與兔角膜上皮細(xì)胞通過Transwell體系進(jìn)行隔離共培養(yǎng)7天，誘導(dǎo)過程中倒置顯微鏡和原子力顯微鏡對(duì)比觀察hUC-MSCs形貌的改變；qRT-PCR檢測誘導(dǎo)前后人臍帶間
5、充質(zhì)干細(xì)胞CK3mRNA,PAX6mRNA表達(dá)量的變化；免疫熒光檢測角蛋白抗體CK3+12,CK14,CK19,PNCA的表達(dá)。設(shè)定共培養(yǎng)組為實(shí)驗(yàn)組，常規(guī)培養(yǎng)hUC-MSCs為對(duì)照組。結(jié)果HUCMSCs形態(tài)比較均一，呈典型的梭形和成纖維形；hUCMSCs高表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表型CD13、CD29、CD73、CD90，不表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞和造血細(xì)胞表型CD14、CD31、CD45、HLA-DR；特定的條件培養(yǎng)液下，hUC-MSCs成功向成骨成脂定向分化。RECEs呈類圓形、多邊形；增殖快，融合后呈鋪路石樣外觀
6、；CCK8法測定RECEs的生長曲線呈S形；免疫組化檢測RECEs表達(dá)角膜上皮細(xì)胞特異性角蛋白CK3+12。HUC-MSCs與RECEs共培養(yǎng)誘導(dǎo)七天后，倒置顯微鏡下體積變大，核漿比變小；原子力顯微鏡下觀察hUC-MSCs胞體寬大，胞膜表面立體感減弱；CK3mRNA和PAX6mRNA表達(dá)量均比誘導(dǎo)前顯著增加（P<0.05）；免疫熒光檢測CK3+12，CK14,CK19,PCNA表達(dá)陽性。結(jié)論在Transwell共培養(yǎng)體系下，人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞可以向角膜上皮樣細(xì)胞分化。關(guān)鍵詞人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，兔角膜
7、上皮細(xì)胞，共培養(yǎng)，誘導(dǎo)I暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractObjectiveToinvestigatethedifferentiationpotentialofhumanumbilicalcord-derivedmesenchymalstemcells(hUC-MSCs)inducingintocornealepithelial-likecellsintranswellculturesystem.MethodsMesenchymalstemcellswereculturedfromhumanumb
8、ilicalcordusingcollagenaseIVdigestionmethod，hUC-MSCssurfacemarkerswereexaminedbyflowcytometry，thethirdpassagecellsweretransferredintoadifferentmediumandosteogenicdifferentiation,adipogenicdifferentiationwereassessed.Weobtainedrabbit'sco
