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《黃連素體外誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)樣細胞分化》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、目錄中文摘要??????????????????????????l英文摘要??????????????????????????4研究論文黃連素體外誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)樣細胞分化前言???????????????????????????8日U舌???????????????????????????8材料與方法???????????????????????．．9結(jié)果??????????????????????????15附圖??????????????????????????18附表???????????????????????．．31討論???
2、???????????????????????34結(jié)論??????????????????????????．37參考文獻???????????．．????????????．38綜述中藥誘導間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)樣細胞分化的研究?????43致謝????????????????????????????54個人簡歷??????????????????????????55中文摘要黃連素體外誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)樣細胞分化摘要目的：對分離培養(yǎng)的人臍帶間充質(zhì)干細胞(humanumbilicalcordmesenchymalstemcells，hUMSCs)生
3、物學特性進行鑒定，探討黃連素在體外定向誘導hUMSCs向神經(jīng)細胞分化中的作用和條件，為定向誘導hUMSCs向神經(jīng)分化以及在臨床上的應用提供理論支持和實驗基礎。方法：取足月剖宮產(chǎn)健康新生兒臍帶，用D．Hank’S充分沖洗，剔除臍動脈、臍靜脈，將所剩的臍帶間質(zhì)組織用組織剪切成1mm3大小的組織塊，0．2％膠原酶II消化，在含20％胎牛血清(FBS)、2ng／ml表皮細胞生長因子(EGF)、25mM左旋谷氨酰胺(L—Glu)、100U／ml青霉素、100斗g／ml鏈霉素的DMEM／F12中培養(yǎng)。觀察提取的原代細胞的生長狀況，當細胞融合至80％"--'90％
4、密度時，加入0．25％胰酶一lmMEDTA進行消化，并傳代。采用流式細胞術(shù)對首次消化后收集的細胞表型進行檢測，包括CDllb、CDl9、CD34、CD45、CD73、CD90、CDl05和組織相容性抗原肌A．DR(MHC．II)，以抗鼠IgGl一PE和IgGl一FITC作為同型對照。原代hUMSCs按比例1：1傳代后記作P1代，倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化及生長速度，細胞融合達到90％以上時按1：2或1：3比例傳代，繪制細胞生長曲線。取生長狀態(tài)良好P4代的hUMSCs，分為五組：200斗g／ml組、100I，tg／ml組、50pg／ml組、25l-t
5、g／rnl組和對照組。以3x104／孑L的密度接種于5個多聚賴氨酸包被的六孔板中(每個六孔板為一組)，待細胞融合達到70—80％時，實驗組的四個六孔板分別換為含有200I．tg／ml、1001xg／ml、50I．tg／ml、251ag／ml黃連素的無血清低糖DMEM／F12培養(yǎng)基的誘導液；對照組六孔板除不加黃連素外，其余均同實驗組。倒置顯微鏡下動態(tài)觀察細胞形態(tài)變化，每12小時一次，連續(xù)觀察7天，每24h對各組細胞進行免疫細胞化學染色，檢測其神經(jīng)元標志(NSE)、星形膠質(zhì)細胞標志(GFAP)和神經(jīng)干細胞標志(Nestin)的表達情況。各組隨機選取10個
6、高倍視野，拍照記錄計數(shù)陽性細胞數(shù)及細胞總數(shù)，用以計算分化率，結(jié)果用均數(shù)士標準差來表中文摘要示。分析不同濃度黃連素誘導hUMSCs的分化率。結(jié)果：原代細胞消化、傳代12h后，大部分細胞貼壁，細胞呈三角形、菱形、橢圓形、圓點等形態(tài)；隨培養(yǎng)時間延長，細胞逐漸變成均一的長梭形，數(shù)量增多。培養(yǎng)7．8d時細胞融合可達80％．90％，低倍鏡下看到n刪SCs呈放射狀、漩渦狀排列。按照1：2的比例再傳代，連續(xù)傳至P15代，hUMSCs仍保持旺盛的增殖能力。流式細胞術(shù)檢測P3、P5和P10代細胞表面分子標記，結(jié)果顯示各代均表達CD73、CD90和CDl05，而不表達CD
7、llb、CDl9、CD34、CD45和HLA—DR。加入黃連素誘導液后24h，20099／ml組和100陷／ml組有個別細胞開始發(fā)生形態(tài)改變，光學顯微鏡下可見：胞體收縮變圓，折光度增強，伸出指狀突起；501ag／ml組、25}tg／ml組細胞形態(tài)未見明顯改變。隨著誘導時間延長，細胞胞體進一步收縮，突起增長。36h后部分細胞出現(xiàn)雙極突起，以2001xg／ml組變化最為明顯。48h后200刪、10099／ml組細胞突起較前更加細長，并可多達2至5條，有的細胞突起逐漸發(fā)展成多級，并彼此接觸交叉，呈神經(jīng)樣網(wǎng)絡樣結(jié)構(gòu)；此時，501xg／ml組亦可見到少量細胞胞
8、體收縮、指狀突起形成；2599／ml組則未見明顯變化。60h后20099／ml、1001xg／ml組內(nèi)相臨細
