靚精對(duì)豬配子及胚胎發(fā)育的影響

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1、AGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI碩士學(xué)位（畢業(yè)）論文靚精對(duì)豬配子及胚胎發(fā)育的影響學(xué)位申請(qǐng)人：陳丹朔指導(dǎo)教師：李樹(shù)靜教授學(xué)科專(zhuān)業(yè)：動(dòng)物遺傳育種與繁殖學(xué)位類(lèi)別：農(nóng)學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯曰期：二〇一五年五月三十曰獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得河北農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：博、丹句簽字円期〖

2、月7曰學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解河北農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)河北農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū)）學(xué)位論文作者簽名:商躺導(dǎo)師簽名:簽字時(shí)間：年<月I曰簽字時(shí)間：丨f年分類(lèi)號(hào)：S814.3單位代碼：10086密級(jí)：公開(kāi)學(xué)號(hào)：2012339靚精對(duì)豬配子及胚胎發(fā)育的影響TheeffectofLiangjingtopiggameteandembryonicdevelop

3、ment學(xué)位申請(qǐng)人：陳丹朔指導(dǎo)教師：李樹(shù)靜教授學(xué)科專(zhuān)業(yè)：動(dòng)物遺傳育種與繁殖學(xué)位類(lèi)別：農(nóng)學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二〇一五年五月三十日摘要人工授精技術(shù)能夠降低豬養(yǎng)殖業(yè)的生產(chǎn)成本，從而提高經(jīng)濟(jì)效益，還可以通過(guò)推廣優(yōu)秀種公豬精液，加速品種改良。而精液的保存水平則是關(guān)乎人工授精技術(shù)效果的重要環(huán)節(jié)。目前，應(yīng)用廣泛的豬精液保存方法為常溫保存法，為了更好的提高種公豬利用效率，推動(dòng)人工授精技術(shù)的發(fā)展，豬精液的稀釋保存也就成了最關(guān)鍵的技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)主要研究藥物靚精添加至精液稀釋液中對(duì)于精子受精能力等指標(biāo)的影響，但首先需要觀察靚精對(duì)卵母細(xì)胞的影響，所以在卵母細(xì)胞成熟液M199中添加0.5%、0.75%、

4、1%三種不同濃度的靚精，將卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)1h后換至正常培養(yǎng)液中，最終與空白對(duì)照組進(jìn)行成熟率比較，結(jié)果通過(guò)DAPI染色發(fā)現(xiàn)，三種濃度的靚精對(duì)豬卵母細(xì)胞的成熟均無(wú)不良影響；接著對(duì)經(jīng)過(guò)含三種不同濃度靚精的成熟培養(yǎng)液培養(yǎng)成熟的卵母細(xì)胞和空白對(duì)照組的卵母細(xì)胞進(jìn)行孤雌，比較卵裂率和囊胚率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)卵母細(xì)胞成熟期間添加不同濃度的靚精不會(huì)影響卵母細(xì)胞孤雌后的胚胎發(fā)育能力，隨后又通過(guò)囊胚TUNEL凋亡染色，發(fā)現(xiàn)囊胚總細(xì)胞數(shù)和凋亡細(xì)胞數(shù)在四組間也沒(méi)有顯著差異，進(jìn)一步說(shuō)明卵母細(xì)胞成熟期間添加靚精不會(huì)影響卵母細(xì)胞的后續(xù)胚胎發(fā)育能力。之后在孤雌后的胚胎培養(yǎng)液PZM-3中加入相同的三種濃度的靚精，培養(yǎng)4h后全部換至正常

5、胚胎培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)，與空白對(duì)照組比較卵裂率、囊胚率以及染色后計(jì)算出的囊胚總細(xì)胞數(shù)和凋亡細(xì)胞數(shù)，結(jié)果顯示卵裂率、囊胚率、囊胚總細(xì)胞數(shù)和凋亡細(xì)胞數(shù)在四組間都沒(méi)有顯著差異，說(shuō)明胚胎在發(fā)育期間接觸這三種濃度的靚精不會(huì)影響胚胎的發(fā)育能力。添加相同的三種濃度靚精至精液稀釋液中，使用計(jì)算機(jī)輔助精液分析系統(tǒng)（CASA）檢測(cè)經(jīng)精液稀釋液稀釋后的精液的活率、A級(jí)+B級(jí)精子比例、直線運(yùn)動(dòng)精子活率、精子平均直線運(yùn)動(dòng)速度（VSL）、精子平均側(cè)擺幅度（ALH）、精子運(yùn)動(dòng)直線性（LIN）、精子運(yùn)動(dòng)擺動(dòng)性（WOB）、精子運(yùn)動(dòng)前向性（STR）等指標(biāo)。分析后發(fā)現(xiàn)在30h時(shí)0.75%組的直線運(yùn)動(dòng)精子活率顯著高于1%組，而與其他兩

6、組間無(wú)顯著差異。42h時(shí)0.75%組的精子活率顯著高于對(duì)照組，而與0.5%及1%兩組間沒(méi)有顯著差異；并且0.75%組的A+B級(jí)精子比例顯著高于對(duì)照組和0.5%組；而0.75%組的直線運(yùn)動(dòng)精子活率顯著高于其他三組。同時(shí)通過(guò)多因素方差分析和精子各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)隨時(shí)間變化的折線圖發(fā)現(xiàn)隨著存儲(chǔ)時(shí)間的延長(zhǎng)靚精添加濃度為0.75%的精子指標(biāo)如精子活率、A級(jí)和B級(jí)精子的比例、直線運(yùn)動(dòng)精子活率、精子平均直線運(yùn)動(dòng)速度（VSL）、精子平均側(cè)擺幅度（ALH）、精子運(yùn)動(dòng)直線性（LIN）、精子運(yùn)動(dòng)前向性（STR）等的變化幅度都比其他三組的相對(duì)應(yīng)指標(biāo)的變化幅度小，綜合這些結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)含0.75%濃度靚精的精液稀釋液對(duì)于保存一

7、定時(shí)間的精液的效果更佳。使用含0.5%、0.75%和1%三種濃度靚精的精液稀釋液稀釋的精液和正常稀釋液稀釋的精液進(jìn)行體外受精，發(fā)現(xiàn)無(wú)論是卵裂率、囊胚率還是囊胚總細(xì)胞數(shù)、凋亡細(xì)胞數(shù)，在四組間均無(wú)顯著差異，這一結(jié)果與精子數(shù)據(jù)結(jié)合說(shuō)明含0.75%靚精的精液稀釋液能夠維持保存一定時(shí)間的精液的運(yùn)動(dòng)能力和活率，但是沒(méi)有提高體外受精的IV效果，而對(duì)于人工授精技術(shù)的效果影響仍需進(jìn)一步研究。關(guān)鍵詞：豬精液；靚精；精