適配體傳感器在卡那霉素檢測(cè)中的應(yīng)用

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1、分類號(hào)密級(jí)碩±學(xué)位論文題目：適配體傳感器在卡那霉素檢測(cè)中的應(yīng)用ｃａｔｏｎｏｆａｔ；ｓｅｎｓｓｉｎ化ｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ英文并列題目；Ａｐｐｌｉｉｓｐａｏｒｋａｎａｍｃｉｎｙ研％生：羅繼寶專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向：生物大分子的結(jié)構(gòu)、功能與制備導(dǎo)師：周楠迪教授；指導(dǎo)小組成員：學(xué)位授予日期答辯委員會(huì)主席：陸健教授江南大學(xué)地址：無(wú)錫市蠢湖大道１８００號(hào)二〇—五年十二月獨(dú)創(chuàng)性聲巧人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究王作及?。崳姳救寺暶魉式坏膶W(xué)位論文是本得的研究成

2、果了文中特別加Ｗ標(biāo)注和致謝的地方外，論文。盡我所知，除中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含本人為獲得江南的材料一同工作的同志大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)。與我對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。、日期：化心＾簽若：?jiǎn)剃悐Z關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明大學(xué)有關(guān)保留：本學(xué)位論文作者完全了解江南、使用學(xué)位論文的規(guī)定論文的復(fù)印件和端盤，允江南大學(xué)有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部口或機(jī)柏送交許論文被查閱和借閑，可Ｗ將學(xué)位論文的全部或部段保分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢人索，可Ｗ采用影印、縮印或擔(dān)描等復(fù)制手存

3、、匯編學(xué)位論文，并丑保本電子文檔的內(nèi)容和紙也質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。簽密的學(xué)位論文在解密后遵守此規(guī)定。心名：＿－導(dǎo)師簽名：—１；－＇王、３。＾棘艾曰期：摘要摘要抗生素作為一類抗感染藥物，自發(fā)現(xiàn)以來(lái)廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥，農(nóng)林業(yè)，漁業(yè)，畜牧業(yè)等領(lǐng)域?？股胤N類繁多，卡那霉素是其中一種常用的氨基糖苷類抗生素，以水溶性硫酸鹽存在，具有抗菌譜廣，殺菌效果明顯等特點(diǎn)。不合理使用抗生素可導(dǎo)致耐藥性增強(qiáng)，內(nèi)毒素的產(chǎn)生和殘留在食源性動(dòng)物體內(nèi)，不論是對(duì)食品質(zhì)量還是安全都產(chǎn)生極大的影響和挑戰(zhàn)。因此，建立操作簡(jiǎn)單，便攜，特異性好，靈敏度高，不需要借助昂貴儀器的卡那霉素檢測(cè)方法

4、，對(duì)于保障動(dòng)物源性食品的安全具有重要意義。本研究針對(duì)卡那霉素的定性和定量分析建立了兩種檢測(cè)方法：第一種是基于核酸適配體的電化學(xué)法；第二種是利用核酸適配體的納米模擬酶比色法。研究?jī)?nèi)容主要包括：建立基于核酸適配體的檢測(cè)卡那霉素的電化學(xué)方法，將末端修飾巰基(-SH)的卡那霉素適配體固定在金電極表面得到適配體功能化的金電極，將該電極置于包含卡那霉素的樣品溶液中，卡那霉素與電極表面適配體特異性結(jié)合產(chǎn)生構(gòu)象變化及電極表面阻抗變3-/4-化，溶液中[Fe(CN)6]充當(dāng)信號(hào)探針，卡那霉素與適配體結(jié)合后產(chǎn)生的電化學(xué)信號(hào)改變可通過(guò)差示脈沖伏安法(DPV)檢測(cè)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。在優(yōu)化條

5、件下（適配體濃度-11μmol·L，適配體自組裝時(shí)間16h，卡那霉素結(jié)合時(shí)間30min），利用電化學(xué)法實(shí)現(xiàn)-1-1卡那霉素的檢測(cè)范圍是0.2到2000nmol·L。以相同濃度(500nmol·L)的慶大霉素，新霉素，鏈霉素，四環(huán)素以及超純水代替卡那霉素驗(yàn)證該檢測(cè)方法對(duì)卡那霉素的特異性。進(jìn)一步對(duì)稀釋5倍的含卡那霉素的牛奶樣品進(jìn)行了直接檢測(cè)，結(jié)果表明牛奶樣品中其他組分對(duì)卡那霉素殘留的檢測(cè)基本沒(méi)有影響，該檢測(cè)方法特異性好，靈敏度，適用于稀釋牛奶樣品中卡那霉素的直接檢測(cè)。建立利用核酸適配體和納米模擬酶的卡那霉素比色檢測(cè)法。金納米顆粒的模擬酶的性質(zhì)可催化H2O2和3,3’,5,

6、5’-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)混合底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)。適配體ssDNA能非共價(jià)吸附在金納米顆粒(AuNPs)表面從而阻礙金納米顆粒與底物的接觸，催化作用被抑制，顯色反應(yīng)不能發(fā)生；卡那霉素特異性結(jié)合金納米顆粒表面的卡那霉素適配體，使其游離到溶液中，金納米顆粒重新暴露而催化活性恢復(fù)，表現(xiàn)為UV-vis比色法中TMB氧化產(chǎn)物(oxTMB)特征峰的吸收變化，通過(guò)650nm處吸光度的不同來(lái)表征卡那霉素濃度。據(jù)此建立的卡那霉素檢測(cè)方法，在優(yōu)化條件下，對(duì)卡那霉素檢測(cè)的線性范圍是5-200-1-1-1nmol·L，檢測(cè)限為5nmol·L。再以相同濃度(500nmol·L)的卡那霉素，慶大

7、霉素，鏈霉素，新霉素以及超純水來(lái)進(jìn)行特異性驗(yàn)證，表明該方法具有較強(qiáng)的特異性。所用納米模擬酶pH值適用范圍寬，pH4.0催化效率最高；溫度耐受性范圍寬，最適催化溫度為45℃，具有催化活性好，穩(wěn)定性高，分散性強(qiáng),可重復(fù)利用的優(yōu)點(diǎn)。關(guān)鍵詞：卡那霉素；適配體；納米模擬酶；電化學(xué)；比色法IAbstractAbstractAsanti-infectivedrugs,antibioticsarewidelyusedinthefieldsofmedicine,agriculture,forestry,fisheriesandanimalhusbandrysincet